3. CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬ N
3.2.4Kết quả so sánh phương pháp PCR và kit API-20E xác ñị nh
V.anguillarum và V. harveyi
Sử dụng bộ Kit API-20E khảo sát ñặc ñiểm sinh hoá của các chủng
Vibrio ñã phân lập. Kết quả trên hình 3-16 và bảng 3-5 cho thấy các chủng V. anguillarum cho phản ứng dương tính với ONPG, ADH, IND, VP, GEL, GLU, MAN, SOR, SAC và phản ứng âm tính với LDC, ODC, H2S, URE, TDA, INO, RHA, AMY và với CIT, ARA các chủng có các phản ứng khác nhau.
Hình 3-16 Kết quả kiểm tra API 20E chủng Va3 (2), HW72 (3) và VIB 395(1)
Kết qủa kiểm tra các chủng vibrio spp. ñã phân lập ñược trình bày ở bảng 3-5, xác ñịnh ñược 13 chủng V. anguillarum và 13 chủng Vibrio harveyi, còn một số chủng thì không có kết quả rõ ràng thuộc về loài nào.
1
2
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………54
Bảng 3-5 Kết quả kiểm tra API 20E Vibrio sp.
TT ðặc ñiểm Kí hiệu V. anguillarum V harveyi V i b r i o
1. β galactosidase ONPG 13 Không xác ñịnh
2. Arginine dihydrolase ADH 13 0
3. Lysine Decarboxylase LDC 0 13 3
4. OrinithineDecarboxylase ODC 0 0 4
5. Sử dụng Citrate CIT 11 0 1 6. Urease URE 0 0 Không xác ñịnh
7. Indol IND 13 0 2
8. Sinh H2S H2S: 0 0 4
9. Dịch hoá Gelatin GEL 13 12 1
10. Axit hoá Arabinose ARA 10 0 2
11. Axit hoá Glucose GLU 13 13 0
12. Axit hoá rhamnose RHA 0 Không xác ñịnh 2
13. Axit hoá Inositol INO 0 0 Không xác ñịnh 14. Axit hoá Mannitol MAN 13 12 0 15. Axit hoá amygdalin AMY 0 Không xác ñịnh 3 16. Axit hoá Sorbitol SOR 13 Không xác ñịnh 2 17. Axit hoá Sucrose SAC 13 0 0
Tổng số vi khuẩn 13 13 4
Như trên ñã nêu, chúng tôi ñã phát hiện ñược 15 chủng V.anguillarum bằng phương pháp khảo sát gen trên các chủng phân lập, sử dụng kit API 20E xác ñịnh lại ñược 13 chủng kết quả tương tự (bảng 3-6). Như vậy ñoạn gen và cặp mồi thiết kếñể phát hiện V.anguillarum ở trên là phù hợp.
Bảng 3-6 Kết quả so sánh phương pháp PCR và API 20E xác ñịnh
V.anguillarum
Phương pháp API 20E Phương pháp PCR T
T Nguồn phân lập
Khuẩn lạc vàng trên
VAM V.anguillarum V.harveyi V.anguillarum
(empA) V.harveyi (luxA) 1. Tôm sú 9 4 4 4 5 2. Tôm chân trắng 6 5 0 6 0 3. Cá song 6 3 2 4 2 4. Cá bơn 6 0 5 0 6 5. Chủng chuẩn 3 1 2 1 2 Tổng 30 13 13 15 15 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………55