- Xỏc ủị nh hàm lượng diệp lục
4.2.Kết quả nghiờn cứu ảnh hưởng của chiếu xạ tia Gamma (γγγγ) nguồn
Co60 ủến sự phỏt sinh hỡnh thỏi khối callus ủồng tiền trong in vitro 4.2.1. Ảnh hưởng của tia gamma ủến tỷ lệ sống và sự phỏt sinh hỡnh thỏi
khối callus ủồng tiền
Gõy ủột biến bằng chiếu xạ hoặc bằng hoỏ chất ủang trở thành một phương phỏp quan trọng trong chọn tạo giống cõy trồng, ủặc biệt là ủối với cụng tỏc chọn tạo giống hoa mới. Số lượng cõy nhõn giống vụ tớnh, trong ủú cú cõy ủồng tiền ủược tạo ra do ủột biến cũn hạn chế cú thể do ủặc ủiểm sinh lý phức tạp hoặc do mức bội thể cao, tớnh bất thụẦChớnh vỡ vậy sự kết hợp giữa kỹ thuật gõy ủột biến chiếu xạ với nuụi cấy in vitro cú tiềm năng cung cấp nguồn vật liệu khởi ủầu cho chọn tạo giống một cỏch nhanh chúng kốm theo số lượng lớn. đõy là việc làm cú ý nghĩa to lớn trong cụng tỏc giống lhi mà phương phỏp lai tạo cũn khỏ cồng kềnh, phức tạp và tốn nhiều thời gian.
Do vậy, song song với việc nghiờn cứu xử lý ủa bội trờn giống ủồng tiền kộp hoa trắng nhị nõu, chỳng tụi cũn tiến hành cỏc thớ nghiệm nghiờn cứu xử lý ủột biến trờn giống ủồng tiền kộp hoa ủỏ nhị nõu bằng phương phỏp chiếu xạ tia Gamma (γ) (nguồn Co60 - việc chiếu xạ ủược thực hiện tại Trung tõm chiếu xạ Quốc gia - Cầu Diễn - Hà Nội).
Chỳng tụi tiến hành xử lý chiếu xạ trờn mẫu cấy in vitro là callus ủang trong giai ủoạn sinh trưởng mạnh, cú màu xanh ủậm, sắp bắt ủầu xuất hiện tiền chồi. Cỏc mẫu ủược xử lý chiếu xạ với 7 liều chiếu khỏc nhau, bao gồm: 3krad, 6krad, 9krad, 12krad, 15krad, 18krad và 21krad. Cỏc mẫu sau khi chiếu xạủược cấy chuyển mụi trường tỏi sinh chồi (M1).
Dưới ủõy là một sốảnh hưởng của tia gamma ủối với callus ủồng tiền ở
một số thời ủiểm sau xử lý:
+ Sau 10 ngày chiếu xạ: callus ở cỏc liều chiếu xạ khỏc nhau vẫn giữ
trạng thỏi bỡnh thường như trước khi ủi xử lý. Trong khi ủú callus ở cụng thức
ủối chứng (khụng chiếu xạ) cú biểu hiện trương to và ủó bắt ủầu xuất hiện chồi.
+ Sau 20 ngày chiếu xạ: một số callus ở cỏc liều chiếu chuyển màu xanh vàng, tất cả cỏc khối callus ủều khụng phỏt sinh chồi. Callus ở cụng thức
ủối chứng phỏt triển bỡnh thường và xuất hiện khỏ nhiều chồi (số chồi trung bỡnh trờn lỏt cắt là 4,7 chồi).
+ Sau 30 ngày chiếu xạ (lần cấy chuyển thứ nhất): tất cả callus ở cỏc cụng thức chiếu xạ ủều ủó xuất hiện màu nõu vàng ủến nõu sẫm ở cỏc diềm tiếp xỳc với mụi trường, ủặc biệt ở cỏc liều chiếu 15krad, 18krad và 21krad phần húa nõu xuất hiện rất nhiều và cú màu nõu sẫm. Ở cỏc liều chiếu thấp như 3krad và 6krad ủó xuất hiện chồi nhưng với số lượng ớt, số lượng chồi tỏi sinh ở liều chiếu 3krad nhiều hơn 6krad. Cỏc liều chiếu cũn lại ủều khụng cú biểu hiện tỏi sinh chồi. Cụng thức ủối chứng số lượng chồi tỏi sinh trờn một lỏt cắt/callus rất nhiều.
Cũng tại thời ủiểm này, chỳng tụi tiến hành cấy chuyển lần 1. Cỏc callus ủược cắt gọt phần mụ già cỗi ủó húa nõu giữ lại phần mụ xanh và cấy chuyển vào mụi trường tỏi sinh chồi (M1) mới (cỏc callus này ủược gọi là
callus C1 ). Cỏc chồi trờn callus ủược tỏch rời và chuyển sang mụi trường nhõn nhanh (M2) (cỏc chồi này ủược gọi là chồi G0).
+ Sau 60 ngày chiếu xạ (lần cấy chuyển thứ hai):
Cỏc chồi G0 ủược tỏch từ cỏc callus xử lý chiếu xạ 3krad sinh trưởng mạnh hơn 6krad. Nhưng nếu so với cỏc chồi tỏch từ ủối chứng, chỳng sinh trưởng chậm hơn.
Cỏc callus C1 của cỏc liều chiếu: 9, 12, 15, 18, 21 krad khụng phỏt triển tỷ lệ húa nõu hoàn toàn ngày càng cao, nhiều nhất ở cỏc liều chiếu 18 và 21 krad. Một vài callus của liều chiếu 3 và 6 krad cú khả năng sống và phỏt sinh chồi mới, tuy nhiờn số lượng chồi ớt, sinh trưởng chậm.
Tiếp tục loại bỏ phần hoỏ nõu của cỏc callus cũn sống sút giữ lại phần màu xanh và cấy chuyển mụi trường tỏi sinh chồi mới (cỏc callus mới này gọi là callus C2).
+ Sau 90 ngày chiếu xạ (lần cấy chuyển thứ ba) cho thấy:
Tỷ lệ callus bị hoỏ nõu hoàn toàn tỷ lệ thuận với liều lượng chiếu, liều chiếu càng cao tỷ lệ chết càng cao. Toàn bộ số callus duy trỡ ủược (cũn màu xanh) của cỏc liều chiếu 12, 15, 18 và 21krad ủều khụng cú khả năng tỏi sinh chồi.
Callus ở liều chiếu 9krad bắt ủầu xuất hiện chồi, song số callus cũn sống của liều chiếu này cũn rất ớt, khả năng tỏi sinh chồi thấp do vậy số lượng chồi tỏi sinh ủược rất thấp (3 chồi/17 mẫu sống).
Bảng 4.11. Kết quả xử lý chiếu xạ khối callus ủồng tiền sau 3 lần cấy chuyển (sau xử lý 90 ngày)
STT Liều lượng xử lý Mẫu xử lý Số mẫu sống Tỷ lệ mẫu sống (%) Số mẫu tỏi sinh Tỷ lệ mẫu tỏi sinh chồi (%) Số chồi tỏi sinh (chồi) 1 đ/C 45 45 100 45 100 810 2 3Krad 45 24 53,3 14 58,3 68 3 6Krad 45 20 44,4 5 25,0 32 4 9Krad 45 17 37,7 2 11,7 3 5 12Krad 45 0 0,0 0 0,0 0 6 15Krad 45 0 0,0 0 0,0 0 7 18Krad 45 0 0,0 0 0,0 0 8 21Krad 45 0 0,0 0 0,0 0
100 58.3 25 11.7 0 0 0 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 T ỷ l ệ m ẫ u t á i si n h c h ồ i (% ) Đối chứng
3Krad 6Krad 9Krad 12Krad 15Krad 18Krad 21Krad
Công thức xử lý
Tỷ lệ mẫu tái sinh chồi
Hỡnh 4.16. Biểu ủồ tỷ lệ mẫu tỏi sinh chồi ở cỏc cụng thức xử lý chiếu xạ
Bảng 4.13 và hỡnh 4.16 thể hiện:
+ Cỏc liều chiếu từ 12 ủến 21 krad là ngưỡng chết (cỏc callus thõm ủen toàn bộ, khụng cú mụ nào cũn xanh). Liều chiếu 3, 6, 9 krad là ngưỡng sống nhưng sau 3 lần cấy chuyển chỉ cú CT: 3, 6 krad là tỏi sinh ủược và cú khả (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
năng tỏi sinh tốt, cũn ở liều chiếu 9 krad thỡ cỏc mụ cũn sống (mụ cú màu xanh) chiếm 37,7 %, tỷ lệ mẫu tỏi sinh chồi là 11,7% vào lần cấy chuyển thứ
4.
+ Cỏc callus 3, 6 krad cú nhiều chồi, phỏt triển tương ủối bỡnh thường. + Cỏc chồi 3 krad sau 3 lần cấy chuyển thỡ ủẻ nhanh, mạnh, phỏt triển như
cõy ủối chứng. Cỏc chồi 6 krad cũng ủẻ nhanh, nhiều nhưng chậm và ớt hơn so với 3 krad.
Hỡnh 4.17. Callus ủồng tiền trước (1) và sau xử lý chiếu xạ 60 ngày (2)
Hỡnh 4.18. Sự phỏt sinh hỡnh thỏi của callus ủồng tiền ở cỏc liều chiếu khỏc nhau sau lần cấy chuyển thứ hai (sau xử lý chiếu xạ 60 ngày)
Ghi chỳ:
đ/C: ủối chứng. 4: Liều chiếu 12 krad 1: Liều chiếu 3 krad. 5: Liều chiếu 15 krad 2: Liều chiếu 6 krad 6: Liều chiếu 18 krad 3: Liều chiếu 9 krad 7: Liều chiếu 21 krad
Hỡnh 4.19. Chồi ủồng tiền tỏi sinh sau chiếu xạ