Tất cả các hóa chất ựều phải là loại tinh khiết phân tắch (TKPT)
Dinatri hydrogen phosphat dodecahydrat (Na2HPO4 .10H2O)
Acid citric (C6H8O7 .H2O)
Acid hydrochloric (HCL) 36%
Natri hydroxid (NaOH)
Muối dinatri của acid ethylen diamin tetraacetic (Na2EDTA.2H2O hay C10H14N2O8Na2. 2H2O)
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 31 Methanol (ký hiệu 1ộ MeOH) dùng cho HPLC
Acetonitril (ký hiệu 1 ACN) dùng cho HPLC
Axắt trichloroacetic (TCA) dùng cho HPLC
Chất chuẩn kháng sinh nhóm Tetracyclin bao gồm: Tetracyclin, Chlortetracyclin và Oxytetracyclin.
đệm McIlvaine pH 4ổ0,05: Cân 28,4g Na2HPO4 khan vào bình ựịnh mức 1l, hòa tan bằng nước cất rồi ựịnh mức tới vạch, lắc ựều hỗn hợp. Cân 21,0g acid citric monohydrat vào bình ựịnh mức 1l khác, hòa tan bằng nước cất, ựịnh mức ựến vạch rồi lắc kỹ. Lấy 1l acid citric ở trên trộn với 625ml Na2HPO4 trong bình 2l. điều chỉnh pH tới 4 ổ 0,05 bằng cách thêm từng giọt HCL 0,1M (8,3ml HCL ựặc/l) hay NaOH 0,1M (4g/l). Hỗn hợp dung dịch này sử dụng trong một tuần.
Dung dịch ựệm McIlvaine Ờ EDTA 0,1M: Thêm 6.05g Na2EDTA.2H2O vào 1,625 l ựệm McIlvaine và trộn hỗn hợp tới khi tan hết. Dung dịch này sử dụng ựược trong 1 tuần.
Acid oxalic trong methanol 0,01M: Hòa tan 1.26 g axắt oxalic dihydrate (loại dùng cho sắc ký) trong bình ựịnh mức 1l, pha loãng dung dịch tới vạch mức bằng methanol và trộn ựều hỗn hợp. Dung dịch ựược sử dụng trong 1 ngày
Dung dịch chuẩn kháng sinh nhóm Tetracyclin: (Pha dung dịch chuẩn ở ựiều kiện tránh ánh sáng trực tiếp và bảo quản trong bình màu nâu)
Dung dịch chuẩn gốc 1000ộg/ml: Cân 100ổ0,1mg các chất chuẩn Tetracyclin, oxytetracyclin và chlortetracyclin vào từng cốc 50ml, hòa tan và chuyển vào bình ựịnh mức 100ml, ựịnh mức bằng MeOH ở nhiệt ựộ phòng, lắc kỹ. Các dung dịch chuẩn gốc bảo quản ở -20oC có thể sử dụng ựược trong 3 tháng.
Hỗn hợp dung dịch chuẩn gốc 100ộg/ml: Lấy 10ml mỗi dung dịch chuẩn gốc 1000ộg/ml ở trên cho vào bình ựịnh mức 100ml, pha loãng tới vạch ựịnh mức bằng methanol ở nhiệt ựộ phòng, lắc kỹ hỗn hợp.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 32 Dung dịch chuẩn làm việc các kháng sinh Tetracyclin 25ộg/ml: Lấy 2,5ml dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc hàm lượng 100ộg/ml vào trong bình ựịnh mức 10 ml, ựịnh mức tới vạch bằng methanol ở nhiệt ựộ phòng, lắc ựều hỗn hợp. Bảo quản dung dịch trong tủ lạnh, pha mới dung dịch này hàng tuần.
Dung dịch chuẩn các kháng sinh nhóm Tetracyclin chạy sắc ký ựược nạp vào mẫu trắng với các nồng ựộ 0,05; 0,10; 0,25; 0,5 và 1ộg/ml bằng cách hút lần lượt 20; 40; 100; 200; 400 ộl chuẩn hỗn hợp Tetracyclin 25ộg/ml vào các bình ựịnh mức 10 ml, thêm 6 ml methanolic oxalic acid, ựịnh mức tới vạch bằng nước cất.
Dung môi pha ựộng chạy HPLC: Cân 1,26g axắt oxalic dihydrat vào cốc 100ml, hòa tan bằng 80ml nước cất và chuyển vào bình ựịnh mức 1l, tráng cốc và ựịnh mức tới vạch bằng nước cất, lắc kỹ. Trộn 800ml dung dịch acid oxalic với 130ml ACN và 70ml MeOH. Lọc qua màng lọc 0,45 ộm, siêu âm ở nhiệt ựộ thường trong 30 phút. Chuẩn bị hàng ngày.