L ỜI CẢ M ƠN
2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨ U
3.4.1 Nghiên cứu trong phòng thí nghiệm
Giám ựịnh thành phần nấm bệnh hại trên mẫu hạt giống trồng tại Thạch Hà - Hà Tĩnh.
Xác ựịnh thành phần bệnh nấm hại lạc trong vụ xuân năm 2010 tại huyện Thạch Hà, tỉnh Hà Tĩnh.
3.4.2 điều tra, nghiên cứu ngoài ựồng ruộng
điều tra tình hình sản xuất lạc và một số bệnh nấm hại lạc chắnh tại huyện Thạch Hà, Hà Tĩnh trong những năm qua.
điều tra diễn biến một số bệnh nấm hại lạc chắnh: + Nhóm bệnh hại lá: ựốm nâu, ựốm ựên, cháy lá, gỉ sắt.
+ Nhóm bệnh hại gốc, rễ: lỡ cổ rễ, héo rũ gốc mốc trắng do Sclerotium rolfsii, héo rũ gốc mốc ựen do Aspergillus niger, héo vàng do Fusarium solani.
Khảo sát hiệu lực của một số loại thuốc hóa học ựối với nấm gây bệnh
ựốm ựen và ựốm nâu, gỉ sắt ngoài ựồng ruộng.
Khảo sát hiệu lực của chế phẩm nấm ựối kháng Trichoderma viride
phòng trừ bệnh nấm hại vùng gốc, rễ lạc trên ựồng ruộng.
3.5 Phương pháp nghiên cứu.
3.5.1 Phương pháp thu thập thông tin
Phương pháp tiến hành: Thu thập số liệu từ nguồn niên giám thống kê của huyện Thạch Hà, tỉnh Hà Tĩnh, số liệu lưu hàng năm tại trạm BVTV huyện Thạch Hà.
3.5.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thắ nghiệm
3.5.2.1 Phương pháp nấu môi trường
* Môi trường PGA (Potato- Glucose- Agar)
Thành phần: + Khoai tây 200 g + Glucose 20 g + Agar 20 g + Nước cất 1000 ml
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...27 Cách ựiều chế: khoai tây gọt vỏ, rửa sạch, thái lát mỏng cho vào nồi cùng với 1000 ml nước cất ựun sôi khoảng 1 giờ. Lọc qua vải lọc, bổ sung nước cất cho ựủ 1000 ml. Cho agar và glucose vào khuấy ựều cho agar tan hết, ựun cho ựến khi sôi. Cho môi trường này vào bình tam giác ựậy nắp bằng giấy bạc, sau ựó ựem hấp khử trùng ở 1210C (1,5 atm) trong vòng 45 phút. để
nguội 55 - 600C trước khi rót ra ựĩa petri ựã khử trùng [2]. * Môi trường WA (Water Agar)
Thành phần: + Agar 20 g
+ Nước cất 1000 ml Cách ựiều chế: tương tự như môi trường PGA
3.5.2.2 Phương pháp phân lập nấm
Chọn những mẫu bệnh còn tươi mới, có triệu chứng ựiển hình ựem về
phòng thắ nghiệm rửa sạch dưới vòi nước sau ựó dùng giấy thấm khô rồi khử
trùng bề mặt bằng cồn 960. Cắt mô bệnh thành từng miếng nhỏ 1 Ờ 2 mm (chứa cả phần mô bệnh và phần mô khoẻ) ựể cấy lên môi trường. Sau 3 Ờ 4 ngày, chọn tản nấm phát triển tốt, cấy truyền sang môi trường PGA (cấy truyền khoảng 4 Ờ 5 lần cho ựến khi thu ựược nấm thuần (Isolate).
Kiểm tra vi sinh vật gây bệnh bằng kắnh hiển vi, xác ựịnh ựặc ựiểm hình thái, mầu sắc, kắch thước của tản nấm, cành bào tử, bào tử phân sinh và các cơ quan sinh sản của nấm [2].
3.5.2.3 Phương pháp thu mẫu hạt giống
Phương pháp lấy mẫu: chọn 3 xã ở huyện Thạch Hà có diện tắch trồng lạc lớn, có ựịa thếựất, công thức luân canh và ựiều kiện sinh thái ựại diện cho vùng. Ở mỗi xã thu thập 10 mẫu giống (mối mẫu 100 g hạt) từ 10 nông hộ. Mẫu ựược trộn theo xã, sau ựó trộn theo huyện thành mẫu tổng hợp, lấy mấu phân tắch từ mẫu tổng hợp.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...28
3.5.2.4 Phương pháp phân lập và giám ựịnh nấm bệnh trên hạt giống lạc
Phương pháp chia mẫu: mẫu hạt giống ựược rải ựều trên mặt phẳng theo hình tròn, chia mặt phẳng thành bốn phần ựều nhau. Lấy mỗi phần một lượng nhất ựịnh sau ựó trộn ựều, lượng mẫu kiểm tra: 400 hạt.
Phương pháp giám ựịnh bệnh hại trên hạt giống bằng phương pháp giấy thấm: đặt 10 hạt trên giấy thấm ựã ựược làm ẩm bằng nước cất vô trùng trong
ựĩa Petri ựã ựược khử trùng. Sau ựó ựặt chúng trong phòng ủ ựảm bảo 12 giờ
sáng, 12 giờ tối ở nhiệt ựộ 22-250C, sau 7 ngày kiểm tra mẫu. Tiến hành soi hạt dưới kắnh hiển vi soi nỗi lần lượt từ vòng ngoài vào trong theo tâm ựĩa,
ựối với những bệnh chưa xác ựịnh ựược rõ thì phải ựưa qua kắnh hiển vi ựể
kiểm tra lại hoặc cho lên môi trường nuôi cấy ựể phân lập và giám ựịnh (theo tài liệu của ICRISAT)
Chỉ tiêu theo dõi: tỷ lệ hạt bị bệnh, tỷ lệ nảy mầm, tỷ lệ hạt thối, tỷ lệ
mầm dị dạng, tỷ lệ hạt bình thường.
3.5.2.5 Phương pháp xác ựịnh tỷ lệ nảy mầm và mức ựộ nhiễm bệnh trên hạt giống sau khi xử lý chế phẩm nấm ựối kháng T.viride
Chúng tôi tiến hành xử lý hạt giống vói các lượng chế phẩm nấm ựối kháng T.viride khác nhau, sau dó tiến hành ựặt ẩm, sau 7 ngày kiểm tra mẫu.
Thắ nghiệm ựược bố trắ theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD), gồm 5 công thức, mỗi công thức là 100 hạt, nhắc lại 3 lần, thử nghiệm trên giống V79.
Thắ nghiệm 1: xác ựịnh tỷ lệ nảy mầm và mức ựộ nhiễm nấm bệnh trên hạt giống khi xử lý chế phẩm nấm ựối kháng T.virideở các lượng khác nhau
CT1: 10 g chế phẩm pha với 30 ml xử lý cho 1 kg hạt giống CT2: 20 g chế phẩm pha với 30 ml xử lý cho 1 kg hạt giống CT3: 30 g chế phẩm pha với 30 ml xử lý cho 1 kg hạt giống CT4: 50 g chế phẩm pha với 30 ml xử lý cho 1 kg hạt giống CT5: không xử lý
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...29 Chỉ tiêu theo dõi: TL nảy mầm, TL mầm và hạt nhiễm nấm.
3.5.3 Phương pháp nghiên cứu ngoài ựồng ruộng
3.5.3.1 Phương pháp ựiều tra bệnh nấm hại lạc
* điều tra thành phần
để xác ựịnh thành phần bệnh nấm hại lạc, chúng tôi tiến hành ựiều tra theo quy ựịnh của Cục Bảo vệ thực vật tiêu chuẩn nghành 10TCN 2003 phương pháp ựiều tra phát hiện sinh vật hại cây trồng [1].
điều tra ựịnh kỳ 7 ngày một lần, mỗi yếu tố ựiều tra 10 ựiểm ngẫu nhiên hoặc nằm ngẫu nhiên trên ựường chéo của khu vực ựiều tra. điểm ựiều tra cách bờ 2 m. Mỗi ựiểm ựiều tra 10 cây ựối với bệnh trên rễ hoặc 10 lá ngẫu nhiên ựối bệnh trên lá, tắnh tỷ lệ bệnh (%).
đánh giá mức ựộ phổ biến của bệnh:
+ : Mức ựộ ắt phổ biến, tỷ lệ bệnh dưới 5% ++ : Mức ựộ phổ biến, tỷ lệ bệnh từ 5-10% +++ : Mức ựộ rất phổ biến, tỷ lệ bệnh trên 10%
* điều tra diễn biến
Chọn khu vực ựiều tra ựại diện cho 3 chân ựất (ựất cát, ựất cát phat, ựất thịt). giống có diện tắch 5 ha.
+ đối với bệnh hại lá:
điều tra ựịnh kỳ 7 ngày một lần theo 10 ựiểm ngẫu nhiên của khu vực
ựiều tra, ựiểm ựiều tra là cố ựịnh, mỗi ựiểm ựiều tra 10 lá (4 lá gốc, 3 lá giữa, 3 lá ngọn), ựếm tổng số lá cây bị bệnh trong tổng số lá cây ựiều tra và tắnh tỷ
lệ bệnh (%), phân cấp bệnh theo thang 5 cấp ựể tắnh chỉ số bệnh %[1]. Cấp 1: < 1% diện tắch lá bị bệnh;
Cấp 2: từ 1 Ờ 5 % diện tắch lá bị bệnh; Cấp 3: > 5% ựến 25 % diện tắch lá bị bệnh; Cấp 4: > 25% ựến 50 % diện tắch lá bị bệnh;
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...30 Cấp 5: > 50% diện tắch lá bị bệnh.
+ đối với bệnh hại gốc, rễ
điều tra ựịnh kỳ 7 ngày một lần theo tuyến ựiều tra, điều tra 10 ựiểm ngẫu nhiên, mỗi ựiểm ựiều tra 10 cây. điểm ựiều tra là cố ựịnh trong suốt vụ trồng.
điều tra ựịnh kỳ theo thời gian sinh trưởng của cây lạc.
3.5.3.2 Phương pháp chẩn ựoán bệnh
Chẩn ựoán bệnh ngoài ựồng ruộng: Dựa vào triệu chứng biểu hiện bệnh bên ngoài ựiển hình.
Chẩn ựoán bệnh trong phòng: Tiến hành thu thập mẫu bệnh - phân lập, nuôi cấy trong phòng thắ nghiệm - Kiểm tra bằng kắnh hiển vi - Phân loại theo các tài liệu giám ựịnh bệnh.
3.5.3.3 Khảo sát một số loại thuốc hóa học trừ nhóm bệnh hại lá
Sử dụng 4 loại thuốc: Oxyclorua ựồng 30WP, Carbenzim 50 WP, Nevo 330 EC, Tilt Super 300EC. Phun theo nồng ựộ hướng dẫn trên bao bì sản phẩm vào các giai ựoạn sinh trưởng khác nhau của cây lạc.
Thắ nghiệm bố trắ trên diện hẹp, ựược thiết kế theo kiểu khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB) (theo Nguyển Thị Lan, 2006 [11].
Diện tắch ô thắ nghiệm: 25 m2, số lần nhắc lại: 3. Sử dụng giống V79
ựể thắ nghiệm.
Thắ nghiệm 2: Nghiên cứu khả năng phòng bệnh ựốm nâu và ựốm ựen và gỉ sắt của một số loại thuốc trừ nấm.
CTTN Tên thuốc Nồng ựộ
CT1 Oxyclorua ựồng 30WP 0,1
CT2 Carbenzim 50 WP 0,1
CT3 Nevo 330 EC 0,2
CT4 Tilt Super 300EC 0,1
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...31 Chỉ tiêu theo dõi: tắnh tỷ lệ bệnh, chỉ số bệnh từựó xác ựịnh loại thuốc hóa học phòng trừ nhóm bệnh hại lá có hiệu quả.
Thắ nghiệm 3: Nghiên cứu khả năng trừ bệnh ựốm nâu, ựốm ựen và gỉ sắt của một số loại thuốc trừ nấm phun khi khi bệnh mới xuất hiện (tỷ lệ
bệnh < 5 %).
CTTN Tên thuốc Nồng ựộ
CT1 Oxyclorua ựồng 30WP 0,1
CT2 Carbenzim 50 WP 0,1
CT3 Nevo 330 EC 0,2
CT4 Tilt Super 300EC 0,1
CT5 (đ/C) Nước lã
Chỉ tiêu theo dõi: tắnh tỷ lệ bệnh, chỉ số bệnh, hiệu lực phòng trừ từựó xác ựịnh loại thuốc hóa học trừ nhóm bệnh nấm hại lá có hiệu quả.
Lượng nước sử dụng trong các thắ nghiệm trên 400 lắt/ha.
3.5.3.4 Khảo sát hiệu lực của một số loại thuốc hóa học và nấm ựối kháng Trichoderma viride ựối với bệnh nấm hại vùng gốc rễ trên ựồng ruộng
Thắ nghiệm 4: Ảnh hưởng của biện pháp xử lý hạt giống bằng một số
loại thuốc hóa học và nấm ựối kháng Trichoderma virideựến khả năng phòng trừ bệnh nấm hại vùng gốc rễ lạc
Chúng tôi tiến hành xử lý hạt giống theo phương pháp xử lý bán ướt. Thiết kế thắ nghiệm gồm 4 công thức với 3 lần nhắc lại, bố trắ theo khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCB), diện tắch ô thắ nghiệm là 25 m2. Thắ nghiệm ựược tiến hành trên giống lạc V79.
CTTN Tên thuốc Liều lượng (g/kg)
CT1 Rampart 35SD 5
CT2 Topsin M 70 WP 5
CT3 Rovral 50 WP 5
CT4 Trichoderma viride 70 CT5 (đ/C) Không xử lý
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...32 Pha thuốc và nấm ựối kháng với 30 ml nước xử lý 1 kg hạt giống, Chỉ tiêu theo dõi: theo dõi tỷ lệ bệnh và so sánh hiệu quả phòng trừ
giữa các công thức
Thắ nghiệm 5: Ảnh hưởng của biện pháp xử lý hạt giống bằng chế
phẩm nấm ựối kháng Trichoderma viride ở các lượng khác nhau ựến khả năng phòng trừ một số bệnh hại vùng gốc rễ cây lạc.
Thắ nghiệm ựược tiến hành trên giống lạc V79, xử lý hạt giống theo phương pháp bán ướt, thiết kế thắ nghiệm gồm 4 công thức với 3 lần nhắc lại theo khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCB), diện tắch ô thắ nghiệm 25 m2.
Công thức 1: xử lý 30g chế phẩm/1kg hạt giống. Công thức 2: xử lý 70g chế phẩm/1kg hạt giống. Công thức 3: xử lý 100g chế phẩm/1kg hạt giống. Công thức 4 (đ/C): không xử lý.
Pha lượng chế phẩm trên với 30 ml nước xử lý cho 1 kg hạt giống Chỉ tiêu theo dõi: theo dõi tỷ lệ bệnh lở cổ rễ, héo gốc mốc ựen, héo rũ
gốc mốc trắng ở các công thức và so sánh hiệu lực ựối kháng giữa các công thức. Thắ nghiệm 6: Ảnh hưởng của biện pháp tưới chế phẩm nấm ựối kháng
Trichoderma viride khi cây lạc nảy mầm ở các lượng khác nhau ựến ựến khả
năng phòng trừ một số bệnh hại vùng gốc rễ cây lạc.
Thắ nghiệm tiến hành trên giống lạc V79, gồm 4 công thức với 3 lần nhắc lại, thiết kế thắ nghiệm theo khối ngẫu nhiên ựầy ựủ (RCB), diện tắch ô thắ nghiệm 25 m2.
Công thức 1: dùng 10g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN. Công thức 2: dùng 25g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN. Công thức 3: dùng 35g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN. Công thức 4 (đ/C): tưới 5 lắt nước cho một ô TN.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...33 Chỉ tiêu theo dõi: Tắnh tỷ lệ bệnh và so sánh hiệu lực phòng trừ giữa các công thức thắ nghiệm.
Thắ nghiệm 7: Ảnh hưởng của biện pháp tưới chế phẩm nấm ựối kháng
Trichoderma viride khi cây lạc bắt ựầu ra nụ ở các lượng khác nhau ựến ựến khả năng phòng trừ một số bệnh hại vùng gốc rễ cây lạc.
Thắ nghiệm tiến hành trên giống lạc V79, gồm 4 công thức với 3 lần nhắc lại, thiết kế thắ nghiệm theo khối ngẫu nhiên ựầy ựủ. diện tắch ô thắ nghiệm 25 m2.
Công thức 1: dùng 10g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN Công thức 2: dùng 25g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN Công thức 3: dùng 35g chế phẩm pha với 5 lắt nước tưới cho một ô TN Công thức 4 (đ/C): tưới 5 lắt nước cho một ô TN
Chỉ tiêu theo dõi: Tắnh tỷ lệ bệnh và so sánh hiệu lực phòng trừ giữa các công thức.
3.5.4 Các chỉ tiêu theo dõi và ựánh giá
* đối với bệnh hại vùng gốc rễ
a - Tỷ lệ bệnh: TLB(%) = ừ 100% b Trong ựó: a là số cây bị bệnh b số cây ựiều tra * đối với bệnh hại lá a - Tỷ lệ bệnh: TLB(%) = ừ 100% b Trong ựó : a là số là bị bệnh b là số lá ựiều tra
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...34 ∑( a ừ b) - Chỉ số bệnh: CSB (%) = ừ 100% N ừ T Trong ựó: a là số lá bị bệnh ở mỗi cấp. b là chỉ số bệnh tương ứng. N là tổng số lá ựiều tra
T chỉ số cấp bệnh cao nhất trong bảng phân cấp.
- Hiệu lực phòng trừ (của thuốc và chế phẩm sinh học) trong thắ nghiệm xử lý hạt giống hoặc thắ nghiệm phun phòng bệnh tắnh theo công thức Abbott: C - T
HLPT (%) = ừ 100% C
Trong ựó: HLPT là hiệu lực của công thức tắnh theo phần trăm. C tỷ lệ bệnh ở công thức không xử lý.
T tỷ lệ bệnh ở công thức xử lý.
- Hiệu lực phòng trừ của chế phẩm sinh học và nấm ựối kháng ựối với thắ nghiệm phun trừ bệnh sử dụng theo công thức Henderson Ờ Tilton:
Cb ừ Ta HLPT (%) = (1- ) ừ 100 Ca ừ Tb Trong ựó: HLPT: là hiệu lực của thuốc tắnh theo phần trăm Ca là chỉ số bệnh ở công thức ựối chứng sau xử lý Cb là chỉ số bệnh ở công thức ựối chứng trước xử lý Ta là chỉ số bệnh ở công thức thắ nghiệm sau xử lý
Tb là chỉ số bệnh ở công thức thắ nghiệm trước xử lý
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...35
4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1 Tình hình sản xuất lạc ở huyện Thạch Hà Ờ Hà Tĩnh trong mấy năm qua
Diện tắch cây lạc của huyện Thạch Hà 2000 ha (chiếm 16%), là cây