Tiến hành lấy mẫu ngô sau 2 tuần xử lý các sản phẩm Neem SO, SO-DE, SO-PY ở liều lượng cao nhất ñối với thí nghiệm trộn trực tiếp các sản phẩm này vào ngô hạt.
Phân tích kiểm tra dư lượng tồn tại trong các mẫu ngô theo các bước sau:
* Lấy mẫu và bảo quản mẫu
Các mẫu ngô ñược lấy ñại diện ở mỗi thí nghiệm. Mỗi thí nghiệm lấy 1 kg ngô ñựng trong túi nilon ñen.
* Xử lý mẫu
- Cân 10 g ngô ở mỗi túi. Nghiền bằng máy nghiền khô IKA thành dạng bột mịn.
- Cho toàn bộ phần bột nghiền vào cốc thủy tinh, thêm 100 ml MeOH khuấy ñều trong 5 phút, ñể qua ñêm.
- ðưa dung dịch rung siêu âm trong 5 phút.
- Chia dung dịch vào 2 cốc, cho vào máy litam trong 3 phút. - Gạn lấy phần lỏng cất quay gần khô.
- Lấy 1ml ñưa vào máy sắc ký lỏng HPLC. Chạy chuẩn azadirachtin, Nimbidin theo phương pháp ngoại chuẩn:
Cột C18(4mm X 250mm), Hệ dung môi: MeOH/ water=65/35(v/v) Tốc ñộ dòng: 0.5 ml/min; Bước sóng: 217nm
Lượng mẫu bơm: 5ul; Thời gian chạy mẫu: 10 phút.
* Phân tích và xử lý kết quả
- Sau khi phân tích kết quả trên máy sắc ký lỏng thu ñược sắc ký ñồ . Sắc ký ñồ cung cấp cho chúng ta thời gian lưu và diện tích peak.
- Lập ñường chuẩn
+ Pha chuẩn ở các nồng ñộ tương ứng: 1ppm, 5ppm,10ppm. + Chạy chuẩn trên máy sắc ký lỏng cùng với mẫu ñã xử lý .
+ Sử dụng phần mềm Microsoft excel, thiết lập ñường chuẩn thể hiện sự phụ thuộc của diện tích peak và hàm lượng hoạt chất theo phương trình hồi qui: y=ax +b
-Xác ñịnh dư lượng hoạt chất tồn dư trên ngô theo ñường chuẩn ñã dựng.
- Dư lượng ñược tính theo công thức: Si * Cc * Vc
Xi = --- Sc * m Trong ñó :
Xi: hàm lượng hoạt chất BVTV có trong 1 kg mẫu (mg/kg) Si: Diện tích peak của mẫu có chất “i” (mm2 )
Sc: Diện tích peak của chuẩn có chất “i “(mm2 )
Cc: Hàm lượng chất “i “ có trong 1ml dung dịch chuẩn (Mg/ml) Vc: Thể tích dịch chiết mẫu cuối cùng (ml)
Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả xác ñịnh hàm lượng dầu Neem và hoạt chất Azadirachtin trong hạt và lá Neem