3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.2 Phương pháp nghiên cứu
3.3.2.1 Phương pháp nghiên cứu ngoài ñồng
- ðiều tra diễn biến mật ñộ của rầy nâu trên cây lúa ñược tiến hành theo phương pháp của Viện Bảo vệ thực vật [19] bằng khay có tráng dầu. Khay có kích thước 20x20x5 cm làm bằng inox có láng một lớp dầu. Khi ñiều tra nghiêng khay 1 góc 450 theo thân cây lúa gần sát măt nước, tiến hành ñập 2
ñập vào thân khóm lúa cho rầy rơi vào khay, sau ñó ñếm trực tiếp nếu mật ñộ hoặc ñổ vào lọñem về phòng thí nghiệm ñếm số lượng và phân loại tuổi rầy. Tổng số rầy bắt ñược
Mật ñộ (con/khay/khóm) = --- Tổng số khay/khóm ñiều tra
- Thu thập mẫu ñược tiến hành theo phương pháp của Viện lúa quốc tế (IRRI) dùng ống hút bằng miệng, 1 ñầu ống hút rầy vào ống truyền vào ống thủy tinh to ở giữa chứa rầy. Sau ñó rầy ñược chuyển vào hộp có kích thước (30 x 30 x 30) cm có khay lúa ñể có thể nuôi sống rầy trong thời gian dài và ñẻ trứng.
Hình 3.3: Thu mẫu trên ñồng ruộng
- Phương pháp ñiều tra tình hình sử dụng thuốc trừ sâu trên lúa bằng phỏng vấn trực tiếp nông dân dựa trên mẫu các câu hỏi có sẵn nhằm thu thập các thông tin chính sau: (chi tiết xem phụ lục)
+ Loại thuốc BVTV nông dân ñã và ñang thường sử dụng trên ruộng lúa của họ.
+ Phương pháp sử dụng thuốc BVTV của nông dân. + Tần suất sử dụng thuốc BVTV trên ñồng ruộng. + Số lần phun thuốc trong một vụ.
Phương pháp ñánh giá hiệu lực của thuốc ñối với rầy nâu
- Phương pháp ñánh giá hiệu lực của 5 thuốc thương mại trừ rầy nâu ngoài ñồng ruộng ñược tiến hành theo tiêu chuẩn 10 TCN 143 - 1990 về Quy phạm khảo nghiệm trên ñồng ruộng hiệu lực phòng trừ các loại rầy trên thân lúa của các thuốc trừ sâu
- Phương pháp bố trí:
- Thí nghiệm diện hẹp, các ô ñược bố trí theo khối ngẫu nhiên ñầy ñủ RCB. - Diện tích ô công thức: 50 m2 Nhắc lại: 03 lần
+ Công thức thí nghiệm
STT Thuốc Liều lượng
1 BASSA 50 EC (Fenobucarb) 1500 (ml/ha) 2 REGENT 800 WG (Fipronil) 30 (gam/ha) 3 CONPHAI 10 WP (Imidacloprid) 400 (gam/ha) 4 VIRTAKO 40 WG
(Chlorantraniliprole + Thiamethoxam)
75 (gam/ha)
5 APPLAUD 25 SC (Buprofezin) 500 (ml/ha)
6 ðỐI CHỨNG Phun nước lã
- Thuốc ñược phun khi mật ñộ rầy nâu ña số rầy cám khoảng 20 - 40 con/khóm.
- Lượng nước thuốc: 500 l/ha - Dụng cụ : Bình bơm tay ñeo vai
3.3.3.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng
Xác ñịnh tính mẫn cảm của rầy nâu qua việc xác ñịnh LD50 và LD95: Phương pháp xác ñịnh LD50 và LD95: Sử dụng phương pháp nhỏ giọt của Matsumura (Matsumura 2009) [43][46]. Việc ñánh giá tiến hành trên rầy trưởng thành cái cánh dài từ thế hệ thứ nhất ñến thế hệ thứ năm. Mỗi thí nghiệm ñược nhắc lại 03 lần với 45 cá thể/nồng ñộ thí nghiệm.
Sử dụng phương pháp nhỏ giọt, trong phương pháp nhỏ giọt thì rầy trưởng thành sẽ ñược gây mê bằng khí CO2 sau ñó sẽ ñược nhỏ thuốc vào lưng bằng máy nhỏ giọt
Pha các nồng ñộ thí nghiệm: Các thuốc kỹ thuật ñược hòa tan trong Aceton ñể làm dung dịch mẹ và từ ñó ñược hòa loãng thành các thang nồng ñộ cần dùng cho từng thí nghiệm. Vì các thuốc kỹ thuật không ñạt ñộ tinh khiết tuyệt ñối nên ñược hiệu chỉnh theo hệ số CF ñể thuốc ñạt 100% hoạt chất.
Hệ số CF ñược hiệu chỉnh theo công thức [43] 100%
CF =
% a.i thuốc kỹ thuật Các giai ñoạn thí nghiệm:
Hình 3.4: Chuẩn bị cây lúa thí nghiệm
- Hút 15 con rầy cái trưởng thành cánh dài sau 2 ngày tuổi cho vào ống tuýp có tấm lưới nilon xâm thủng lỗñể thông hơi.
- Làm bất ñộng rầy: Cho ống tuýp ñựng rầy vào phễu và vặn van từ từ ñể xả hơi CO2 vào với áp suất 15 lít/ phút ñể cố ñịnh trong vòng 30 giây (ñủ thời gian rầy bất ñộng ñể thử nghiệm thuốc). ðổ rầy lên trên ñĩa petri có lót vải màn ở dưới ñể thử nghiệm thuốc.
- Thử nghiệm thuốc: Dùng micro xylanh của máy Microsyrine ñể nhỏ lên mảnh lưng ngực trên thân của các cá thể rầy một lượng thuốc ñồng ñều 0,20 µl mỗi giọt.
Hình 3.6: Thao tác thí nghiệm tiến hành nhỏ giọt
* Theo dõi tỷ lệ chết:
- Theo dõi trong vòng 24 giờ sau khi thử nghiệm trong ñiều kiện của phòng có nhiệt ñộ trung bình dao ñộng 26 - 280C, ẩm ñộ 80 - 85%. Những cá thể không hoạt ñộng bình thường nữa ñược ñếm là số con chết còn những cá thể mà còn ñậu ở trên cây lúa cũng như trên thành lọ (hoạt ñộng bình thường khi chạm vào) ñược coi là những con sống.
+ Thí nghiệm thử thăm dò: Tiến hành các thử nghiệm thăm dò ñể mỗi loại thuốc trừ sâu chọn ñược thang với 5 - 6 nồng ñộ sao cho nồng ñộ cao nhất gây chết: 90 - 95% và thấp nhất gây chết: 5 - 15 % số cá thể ñược thử nghiệm.
Hình 3.7: Các nồng ñộ khác nhau giai ñoạn thử thăm dò
Phương pháp pha: Dung dịch có nồng ñộ cao ñược dùng làm dung dịch mẹ (liều 1) muốn chuyển sang nồng ñộ thấp hơn (liều 2) theo công thức:
C1V1 = C2V2
Trong ñó: C1: nồng ñộ thuốc ở liều 1 C2: nồng ñộ thuốc ở liều 2
V1: thể tích liều thuốc 1 dùng ñể pha chế V2: thể tích liều thuốc 2 dùng ñể pha chế
+ Giai ñoạn thí nghiệm: Thang nồng ñộñã chọn ñược dùng ñể thử cho rầy trưởng thành, mỗi nồng ñộ 3 lần nhắc lại. ðếm số lượng cá thể chết ở từng công thức sau xử lý.
- Phương pháp tính toán LD50 và LD95: bằng chương trình Poloplus
Giá trị LD50 của từng loại thuốc trừ sâu thử nghiệm ñối với các quần thể sâu hại ñược tính toán theo chương trình POLO PLUS (version 2.0). Tỷ lệ chết của sâu hại thử nghiệm với thuốc trừ sâu có tương quan dương với ñường thẳng y = ax + b. Các liều lượng của thuốc ñược logarit và tỷ lệ chết tương
ứng với từng liều thử ñược chuyển thành probit. Mức ñộ tin cậy của giá trị LD50ñược kiểm ñịnh bằng phương pháp χ2
LD50ñược xác ñịnh theo công thức:
Nồng ñộ thuốc (µg/µl) x 0,20 µl LD50 = --- Trọng lượng trung bình con rầy (g)