- Môi trường: Môi trường ở giai đoạn này có thể chuẩn bị theo 2 cách như sau:
2. Phương pháp lên men bán liên tục:
3.3.3.2. Phát triển nấm men để lên men dịch rỉ đường:
1. Môi trường: Môi trường dùng để phát triển nấm men sử dụng cho phương pháp lên men một nồng độ hay hai nồng độđều phải đạt những yêu cầu sau đây:
- Nồng độ dịch rỉđường: 12-12,5%
- Rỉ đường có chất lượng tốt ít bị nhiễm khuẩn.
- Bổ sung đầy đủ các chất dinh dưỡng, lượng chất dinh dưỡng tính theo % như sau: + H3PO4 0,06
+ (NH4)2SO4 0,1-0,3 + Urê 0,1-0,15
Ở các giai đoạn phát triển từ 0,5-20 lít, còn có thể bổ sung thêm dịch đường hóa bằng ngũ cốc (ngô, gạo, đường maltose).
Rỉđường nguyên (80-90 Bx) Pha loãng sơ bộ (45-50 Bx)
Acid hóa bằng HCl
Sát trùng bằng Na2SiF6 (12-13 kg/1tấn rỉ đường)
Bổ sung các chất dinh dưỡng ((NH4)2SO4, (NH2)2CO: lượng nitơ cần thiết là 50g/1tấn rỉđường; H3PO4 70% 12-13,5 kg/10000 lít rượu)
#$
Tất cả các chất dinh dưỡng đều phải cho vào trước khi sát trùng môi trường đểđảm bảo vô trùng môi trường nuôi cấỵ
2. Tiến hành nuôi cấy:
Các điều kiện kỹ thuật phát triển nấm men nguyên chủng từống thạch nghiêng (môi trường cố thể) mở rộng ra ống dịch thể 10 ml, 0,5 lít, 3 lít, 20 lít, 1.000 lít và 5.000 lít, tỷ
lệ nấm men gieo cấy từ giai đoạn 20 lít trởđi cần bảo đảm 15-20% so với môi trường. Quá trình nuôi cấy cần đảm bảo theo các yêu cầu sau:
Giai đoạn nuôi cấy Thời gian nuôi cấy (h)
Nồng độ % chất khô
Độ acid (độ) Nhiệt độ nuôi cấy (oC) Ống nghiệm dịch thể 24 10-12 0,5-0,6 30 Bình cầu 0,5 lít 24 13-14 0,5-0,6 30 Bình cầu 3 lít 24 14-15 0,5-0,6 30 Bình 20 lít 24 15-16 0,7-0,8 30 Thùng 1.000 lít 44 16-17 0,9-1,1 30 Thùng 5.000 lít 18 17-18 0,8-0,9 30
Lượng không khí tiêu hao khi nuôi cấy nấm men ở giai đoạn phát triển thùng nhỏ là 1-2m3/m3.h, ở thùng lớn là 3-5m3/m3.h.