Dịch chiết tảo ựược gửi ựi phân tắch tại Phòng Thử hoạt tắnh sinh học, Viện hóa học, Viện khoa học và Công nghệ Việt Nam theo phương pháp sau:
Phương pháp thử ựộ ựộc tế bào in vitro ựược Viện Ung thư Quốc gia Hoa Kỳ (NCI) xác nhận là phép thử ựộ ựộc tố tế bào chuẩn nhằm sàng lọc, phát hiện các chất có khả năng kìm hãm sự phát triển hoặc diệt tế bào ung thư ở ựiều kiện
in vitro. Dòng tế bào ung thư ở người KB (Humanepidermic carcinoma) Ờ ung thư biểu mô miệng ựược cung cấp bởi ATCC là dòng luôn ựược sử dụng trong các phép thử ựộc tố tế bàọ Tế bào ung thư ựược nuôi cấy trong môi trường RPMI 1640 có bổ sung thêm 10% huyết thanh phôi bò (FBS) ở ựiều kiện chuẩn (5% CO2; 37ồC; ựộ ẩm 98%; vô trùng tuyệt ựối). Tế bào phát triển ở pha log sẽ ựược sử dụng ựể thử ựộc tắnh.
Cho 200 ộl dung tắch tế bào ở các pha log nồng ựộ 3ừ104 TB/ml vào mỗi giếng (ựĩa 96 giếng) trong môi trường RPMI 1640. Dịch chiết tảo ựược xử lắ với tế bào ở các nồng ựộ pha loãng khác nhau sao cho ựạt ựến nồng ựộ cuối cùng là 128 ộg/ml; 32 ộg/ml; 8 ộg/ml; 2 ộg/ml; 0.5 ộg/ml và ủ ở 37ồC, 5% CO2 trong 3 ngàỵ Giếng ựiều khiển (ựối chứng) gồm 200 ộl dung dịch tế bào (3ừ104 TB/ml) ủ ở 37ồC, 5% CO2 trong 3 ngàỵ Cuối cùng thêm 50 ộl MTT (1 mg/ml pha trong môi trường nuôi cấy không huyết thanh) và ủ tiếp ở 37ồC, 5% CO2 trong 4h, loại bỏ môi trường, thêm 100 ộl DMSO, lắc ựều và ựọc kết quả ở các bước sóng 540 nm trên máy spectrophotometer Genios TECAN.
Cách tắnh
Phần trăm kìm hãm sự phát triển của tế bào (Growth inhibition) = (ODựiều khiển Ờ ODmẫu)/ODựiều khiển
Giá trị IC50 ựược tắnh dựa trên kết quả số liệu phần trăm kìm hãm sự phát triển của tế bào bằng phần mềm máy tắnh table curve [11,15].
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN