để xác ựịnh khả năng sinh trưởng của các loài vi tảo nghiên cứu, chúng tôi tiến hành nuôi trực tiếp vi tảo trên các môi trường ựược trình bày trong Phụ lục 1, sau ựó tiến hành ựếm tế bào ựịnh kì 2 ngày/lần trên các môi trường nuôi cấy ựể tìm ra thời gian sinh trưởng tối ựa và môi trường nuôi cấy tối ưu nhất.
Ớ Phương pháp ựếm tế bào bằng buồng ựếm Neubauer
Cấu tạo buồng ựếm Neubauer:
Buồng ựếm Neubauer là một tấm thủy tinh dày khoảng 3 mm, ựược chia làm ba phần. Các phần bên ngăn cách với phần giữa bởi hai rãnh dọc. Phần giữa ựược chia ựôi do một rãnh ngang và thấp hơn hai phần bên 0,1 mm, tạo ra hai ngăn ựếm giống nhaụ Mỗi ngăn ựếm hình vuông, ựược chia thành 16 ô lớn, mỗi ô lớn lại chia thành 16 ô nhỏ. Vậy tổng số ô nhỏ trong một ngăn ựếm là 16ừ16=256 ô nhỏ.
Mỗi ô nhỏ có diện tắch là 1/400 mmỗ, và chiều cao là 1/10 mm. Như vậy thể tắch mỗi ô là: 1/400ừ1/10 = 25ừ mmỠ
Thể tắch một ngăn ựếm là: 25ừ ừ256 = 64ừ mmỠ = 64ừ ml
Mật ựộ tế bào ựược tắnh theo công thức: D = (a/64) ừ Trong ựó: D: mật ựộ tế bào (số tế bào/ml)
a: số tế bào trung bình trong một buồng ựếm
+ Buồng ựếm và lamen ựược lau sạch bằng cồn 70ồ, thấm khô trước khi cho dịch tảo vàọ Lamen ựược ựặt trên buồng ựếm sao cho khi nhìn nghiêng thấy sự giao thoa ánh sáng ở vị trắ tiếp xúc giữa buồng ựếm và lamen. Sau ựó dùng pipet Pasteur hút một ắt dịch tảo ựã ựược lắc ựều và chấm vào cạnh của lamen. Dịch tảo sẽ tràn láng vào buồng ựếm.
+ Buồng ựếm có chứa tảo ựược ựưa lên kắnh hiển vi và quan sát ở vật kắnh 40, thị kắnh 10. đối với những mẫu ựếm quá ựặc không thể ựếm chắnh xác ựược thì pha loãng trước khi ựếm và nhân hệ số pha loãng khi tắnh kết quả.
Trên cơ sở dữ liệu thu ựược qua các ngày ựếm, lập ựường cong sinh trưởng bằng cách ựặt trên trục tung chỉ số mật ựộ tế bào, ựặt trên trục hoành chỉ số thời gian (ngày) nuôi tảọ
Ớ Xác ựịnh môi trường thắch hợp ựể nuôi vi tảo
Trong ựiều kiện tiến hành nghiên cứu, chúng tôi tiến hành thử nghiệm nuôi tảo thuộc chi Chaetoceros trong sáu môi trường nuôi cấy là: F/2, F/2 không silic, ESM, Walne, BBM, ASW (môi trường nước biển nhân tạo). Dịch mẫu tảo và dịch môi trường ở các môi trường nuôi cấy là ựồng nhất, dựa vào kết quả ựếm tế bào ựể tìm ra môi trường nuôi cấy thắch hợp: mật ựộ tế bào ở môi trường nào tốt nhất thì ựó là môi trường tối ưu cho sự sinh trưởng và phát triển của vi tảo nghiên cứụ
2.2.4.Phương pháp xác ựịnh ảnh hưởng của ựộ mặn tới tốc ựộ sinh trưởng
để xác ựịnh ựộ mặn tối ưu cho quá trình sinh trưởng và phát triển của vi tảo chủng TC1, tiến hành nuôi vi tảo chủng TC1 trong môi trường F/2 có ựộ mặn lần lượt là:
đo tốc ựộ sinh trưởng của vi tảo chủng TC1, sẽ xác ựịnh ựược mức ựộ thắch nghi của vi tảo với các nồng ựộ muối và xác ựịnh ựược ựộ mặn tối ưu cho vi tảo chủng TC1 phát triển.