3. nội dung nguyên liệu và ph−ơng pháp nghiên cứu
3.4.Ph−ơng pháp nghiên cứu
Phương phỏp nghiờn cứu ảnh hưởng của thuốc nước Actiso 10% đến sự
hấp thu và phõn bố của Enrofloxacin trong huyết tương, cơ và một số cơ quan nội tạng gà cho theo đường uống và đường tiờm được tiến hành theo phương phỏp vi sinh vật (Dược điển Việt Nam III, năm 2000 [1]) .
Gà thí nghiệm đ−ợc bố trí theo ph−ơng pháp phân lô so sánh:
• Thớ nghiệm 1: 70 gà chia thành 4 lụ theo sơ đồ bố trí thí nghiệm sau:
STT Lô Số gà (con) Lô thí nghiệm
1 Lô I 07 Không uống Enrofloxacin 10% và Actiso 10% 2 Lô II 21 Uống Actiso 10% - liều 2ml/kgP
3 Lô III 21 Uống Enrofloxacin 10% - liều 15 mg/kgP
4 Lô IV 21 Uống Enrofloxacin 10% - liều15mg/kgP và uống Astiso 10% - liều 2ml/ kg P
* Thớ nghiệm 2: 70 gà chia thành 4 lụ theo sơ đồ bố trí thí nghiệm sau:
STT Lô Số gà (con) Lô thí nghiệm
1 Lô I 07 Không tiêm Enrofloxacin 5% và Actiso 10% 2 Lô II 21 Uống Actiso 10% - liều 2ml/kgP
3 Lô III 21 Tiêm Enrofloxacin 5% - liều 15 mg/kgP
4 Lô IV 21 Tiêm Enrofloxacin 5% - liều 15mg/kgP và uống Astiso 10% - liều 2ml/ kgP
Gà thí nghiệm và gà làm đối chứng đ−ợc nuôi trong điều kiện nh− nhau, n−ớc uống và thức ăn hàng ngày đ−ợc cung cấp tự do.
Mỗi con gà trong các lô đều đ−ợc đánh dấu theo thứ tự từ một đến hết. Ngay tr−ớc khi uống, tiêm thuốc, lấy mỗi con 1ml máu cho vào ống li tâm có sẵn Citratnatri dạng khan đã đ−ợc vô trùng, những mẫu máu này dùng để lấy huyết t−ơng làm đối chứng với huyết t−ơng của chính bản thân chúng sau khi đã uống, tiêm thuốc. Sau đó chúng tôi tiến hành cho gà uống và tiêm thuốc Enrofloxacin theo cách bố trí thí nghiệm, rồi tiến hành trình tự theo các b- −ớc:
* B−ớc I:
• Nghiên cứu sự hấp thu và phân bố của Enrofloxacin trong huyết t−ơng gà đ−ợc tiến hành nh− sau:
Sau khi uống, tiêm: 30 phút, 1 giờ, 2 giờ, 4 giờ, 6 giờ, 8 giờ, 10 giờ, 12 giờ, 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ, 72 giờ. Mỗi thời điểm lấy 1ml máu/con (ở tĩnh mạch cánh) cho vào ống li tâm có sẵn Citratnatri khan, đậy nút, đánh dấu máu của từng con sau đó mang li tâm với tốc độ 3000vòng/phút trong 15 phút, sau đó chắt huyết
t−ơng làm kháng sinh đồ theo ph−ơng pháp đặt ống trụ.
• Nghiên cứu sự phân bố của thuốc trong các cơ quan phủ tạng gà ở thời điểm 4 giờ, 8 giờ, 12 giờ, 18 giờ, 24giờ, 48 giờ và 72 giờ đ−ợc tiến hành nh− sau:
ở các thời điểm trên giết mổ gà ở lô thí nghiệm và lô đối chứng. Dùng panh, kéo vô trùng để lấy mẫu ở một số tổ chức và phủ tạng nh−: gan, thận, lách, phổi, cơ l−ờn, cơ đùi, cơ tim. Mỗi mẫu lấy từ 1,00g sau đó nghiền nát với n−ớc sinh lí vô trùng theo tỉ lệ 1:1 (1g mẫu với 1ml n−ớc sinh lí) rồi cho vào ống li tâm, li tâm với tốc độ 3000 vòng/phút trong 30 phút. Sau đó bỏ ra hút lấy phần dịch trong làm kháng sinh đồ bằng ph−ơng pháp đặt ống trụ nh− đối với huyết t−ơng.
* B−ớc II:
Thạch nền đ−ợc hấp ở 1210C/20 phút cho nóng chảy rồi đổ vào mỗi hộp lồng (đã đ−ợc rửa sạch, vô trùng) 8 - 10ml, láng cho thạch dàn đều trên đáy hộp lồng. Để yên tĩnh trên mặt phẳng nằm ngang từ 5 - 10 phút để cho thạch đông cứng lại.
Thạch tráng sau khi đ−ợc hấp nóng chảy, đổ vào cốc đong loại 100ml có chia độ. Dùng nhiệt kế loại đo nhiệt độ trực tiếp để kiểm tra nhiệt độ. Khi nhiệt độ của thạch tráng xuống đến 45 - 500C thì cho canh khuẩn Bacillus subtilis 18 - 24 giờ vào (tỷ lệ 0,2ml canh khuẩn/100ml thạch) dùng đũa thuỷ tinh đã đ−ợc vô trùng trộn đều rồi đổ vào mỗi hộp lồng (đã có thạch nền đ−ợc chuẩn bị ở phần trên) 8 - 10ml. Láng cho chúng dàn đều trên mặt thạch nền, để yên tĩnh trên mặt phẳng nằm ngang khoảng 5 phút. Đặt vào mỗi hộp lồng 4 ống trụ đã đ−ợc vô trùng, khi đặt ống trụ phải chú ý các yêu cầu sau:
+ Thao tác phải dứt khoát, chỉ đặt mỗi ống một lần, khi đã cắm và thạch rồi thì tuyệt đối không điều chỉnh lại nữa;
+ ống trụ chỉ vừa vặn qua hết lớp thạch tráng, vừa chạm mặt thạch nền thì dừng lại;
+ Bốn ống trụ phải cách đều nhau và cách đều thành hộp lồng.
* B−ớc III:
Hút từ mỗi mẫu 0,4ml huyết t−ơng (hoặc n−ớc chiết tổ chức) đ−ợc chuẩn bị từ b−ớc một, cho vào mỗi ống trụ (trong hộp lồng đ−ợc chuẩn bị ở b−ớc II) 0,2ml. Cứ một mẫu thì cho vào hai ống trụ đối xứng nhau. Đánh dấu các mẫu t−ơng ứng với ống trụ. Để yên tĩnh trong điều kiện phòng khoảng 30 phút sau đó chuyển vào nuôi d−ỡng trong tủ ấm 370C/18 - 24 giờ thì bỏ ra dùng th−ớc đo mm đo đ−ờng kính vòng vô khuẩn nếu có. Các b−ớc II và III phải tiến hành trong tủ cấy ERHET
Tiến hành xây dựng đ−ờng kháng sinh chuẩn để tính kết quả
Dùng kháng sinh Enrofloxacin dạng chuẩn, pha với n−ớc sinh lí thành các nồng độ: 0,1; 0,2; 0,25; 0,50; 1; 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10 àg/1ml. Sau đó làm kháng sinh đồ nh− ở phần trên. Đo đ−ờng kính vòng vô khuẩn của dãy nồng độ thuốc chuẩn này ta sẽ thiết lập đ−ợc một đ−ờng t−ơng quan chuẩn giữa đ−ờng kính vòng vô khuẩn với nồng độ thuốc. Đối chiếu đ−ờng kính vòng vô khuẩn của các mẫu với đ−ờng t−ơng quan chuẩn này ta sẽ tính đ−ợc số microgam thuốc có trong 1ml huyết t−ơng hoặc 1g tổ chức. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});