b. Tốc độ giấy
3.2.1 Chọn hạt pha tĩnh và kích thớc hạt pha tĩnh.
Pha tĩnh là một trong hai yếu tố quan trọng quyết định hiệu quả sự tách cuả các chất. Trong việc tách sắc kí thì bản chất của chất phân tích là yếu tố quyết định đến việc chọn loại pha tĩnh nào và kích thớc của hạt chất pha tĩnh. Đối tợng phân tích của chúng tôi là các hợp chất clophenol có khối lợng và phân tử không lớn lắm. Thuộc loại hợp chất ít phân cực. Do tính chất của chất phân tích và tính chất ổn định của hệ pha ngợc nên chúng tôi đã chọn kiểu sắc kí hệ pha ngợc để nghiên cứu và tìm điều kiện tách .
Trên cơ sở thiết bị có sẵn của phòng thí nghiệm VH2 chúng tôi đã chọn 2 loại hạt pha tĩnh ODS của 2 hãng sản xuất khác nhau MERCK (CH Liên bang Đức) và hãng Shandow (USA), có kích thớc hạt là 5 àm và 5 àm để phục vụ cho nghiên cứu này .Bảng 3.2 và hình 3.2 cho ta thấy ảnh hởng của kích thớc hạt pha tĩnh đến kết quả tách
Bảng 3.2: Kích thớc hạt nhồi pha tĩnh
STT Hãng sản xuất Đờng kính hạt (Trung bình) Kích thớc cột
1 Shandow(USA) 5 àm 250 x 4,6 mm
2 Merck (CHLB Đức) 5 àm 250 x 4,6mm
Điều kiện đợc chọn để khảo sát:
Pha động :metanol/H20/ Acetolnitril (49:48:3 V/V) Tốc độ pha động: 1.4ml/phút
Detector UV :225nm Băng hấp thụ : 0.05Aufs
Tốc độ giấy: 2mm/phút
Mẫu hỗn hợp: 2clophenol; 2.4Diclophenol; 2.4.6Triclophenol; 2.3.4.6Tetraclophenol: Pentaclophenol(1ppm).
Hình 3.2. ảnh hởng của kích thớc hạt pha tĩnh đến kết quả tách.
Trong sắc kí hấp thụ pha ngợc (RP-HPLC), pha tĩnh là hạt chất nhồi có bề mặt không phân cực hay ít phân cực. Đó là các hạt silica trần đã đợc alkyl hoá bề mặt phân cực. Trong HPLC pha tĩnh phải thoả mãn điều kiện nh: Phải trơ và bền vững với các điều kiện của môi trờng sắc kí, có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất trong điều kiện sắc ký nhất định, độ xốp phải ổn định không bị biến dạng hay thay đổi trong quá trình sắc kí, cân bằng động học của sự tách phải xảy ra nhanh và lặp lại, cỡ hạt phải đồng đều... thì mới có kết quả tốt.
Qua thực nghiệm, chúng tôi thấy rằng ở mức độ phân tích thì đờng kính 5àm là tốt nhất. Bởi vì đờng kính này cỡ hạt nhỏ và đều làm tăng độ phân giải, có nghĩa là làm giảm chiều cao của 1 đĩa sắc kí, do vậy tăng hiệu suất tách sắc
kí. Hơn nữa 1 trong những yêu cầu của pha tĩnh là độ xốp. Độ xốp của pha tĩnh ảnh hởng nhiều đến khả tách sắc kí. Pha tĩnh Hypersil ODS 5àm có kích thớc tròn, có cấu trúc xốp là loại xốp toàn phần do vậy hiệu suất tách khá tốt. Hơn nữa hạt chất này có sự đồng đều về kích thớc vì vậy sự tách sắc kí sẽ tốt hơn (hình 3.2 nhóm pic số 1) . Theo tác giả John W. Dolan chúng ta có thể ớc tính đợc khả năng tách của hỗn hợp mẫu phân tích khi chúng ta biết đợc đờng kính pha tĩnh và chiều dài cột tách qua công thức gần đúng.
N ≈ 3000 . L/dp
Nh vậy, với cột tách L = 250mm, pha tĩnh Hypersyl ODS: - Loại 5àm có số đĩa lý thuyết N5 ≈ 16.000 đĩa.
- Điều này phù hợp và lý giải cho kết quả sắc kí của chúng tôi.
Chúng tôi chọn loại hạt pha tĩnh có đờng kính 5àm cho các nghiên cứu tiếp theo.