3.1. Chọn các thông số cho máy hplc3.1.1.Chọn van bơm mẫu 3.1.1.Chọn van bơm mẫu
Van bơm mẫu là một dụng cụ để đa một lơng mẫu chính xác mẫu phân tích vào cột sắc ký thông qua vòng mẫu . Vòng mẫu là một yếu tố xác định có thể thay đổi đợc thay đổi đợc, tuỳ theo lợng mẫu ta cần bơm. . Vòng mẫu cũng là nguyên nhân gây ra sự doãng píc.
Nói chung sự doãng píc sắc ký ngoài các yếu tố và điều kiện tách trong cột sắc ký quyết định còn có các yếu tố khác cộng thêm vào nh van bơm mẫu, detecter hệ thống ống dẫn... Nên độ rộng tổng cộng của pic sắc kí sẽ do các yếu tố này gây nên . Các yếu tố này là những yếu tố không mong muốn . Nếu loại trừ những yếu tố này hay chọn đợc điều kiện thích hợp để cho nó không bị thay đổi và có giá trị nhỏ nhất , nh vậy chúng ta mới có hiệu suất tách tốt , và píc sắc ký mới phản ánh đúng quá trình tách trong cột sắc kí. Theo tác giả Phạm Luận [3] . thành phần này không đợc chiếm hơn 10% trong tổng độ rộng của píc sắc kí.
Với một thể tích mẩu nhất định nhỏ hơn thể tích v0, thì khi mẫu đợc bơm vào cột tăng thì chiều cao của pic sắc kí cũng tăng một cách tuyến tính. Nếu l- ợng mẫu nạp vào cột vs lớn hơn so với v0 thì chiều cao của píc không tăng tuyến tính với lợng mẫu mà độ rộng của pic tăng nhanh (doãng píc).
Trong thực tế phân tích HPLC, ngời ta thờng bơm một lợng mẫu nhỏ hơn v0.
Để có hiệu quả tách cao nhất hệ van 6 chiều ngày nay có thể bơm mẫu trực tiếp bằng micro-xylanh theo thể tích mẫu mong muốn , khi lợng mẫu nhỏ hơn kích thớc vòng mẫu thì van này cũng rầt thuận tiện vì ta không phải pha loãng mẫu.
Trong phần thc ngiệm này, chúng tôi chọn loại van bơm mẫu 6 chiều và vòng mẫu loại 20àl, để nạp mẫu vào cột tách với thể tích mẫu chính xác là 20àl cho mỗi lần sắc kí.
3.1.2 . Điều kiên ghi pic sắc kí.
Để ghi nhận và theo dõi kết quả của sự tách sắc kí , chúng tôi đã dùng máy tự ghi để ghi lại sắc đồ tách ở dạng các pic sắc kí , vì thế cần phải chọn 2 yếu tố sau: