b. Tốc độ giấy
3.1.3. Khảo sát chọn điều kiện phát hiện chất phân tích.
Để phát hiện và xác định chất phân tích, chúng tôi đã chọn:
Loại detecter UV-VIS (vùng tử ngoại ). Đây là loại detec ter có độ nhậy tơng đối cao và thông dụng trong các phòng thí ngiệm. Vì thế trớc hết phải chọn băng hấp phụ phù hợp với vùng nồng độ chất ngiên cứu.
Việc chọn băng hấp thụ là chọn độ nhậy cho phép đo. Băng hấp thụ có chỉ số càng nhỏ thì độ nhậy càng cao.Do nồng độ của các clophenol trong nơc có nồng độ thấp nên chúng tôi đã chọn băng hấp thụ 0.02Aufs .Cho việc ghi tín hiệu hấp thụ của chất ngiên cứu .Với giá trị này thì khoảng nồng độ có thể phát hiện và đo của các clophenol nằm trong vùng từ nano gam(ng) đến microgam (àg). Tiếp đó là việc xác định bớc sóng hấp thụ cực đại của chất ngiên cứu. Đối với các clophenol các tác giả nh Jitka Frébortová[21] . Đã chỉ ra các vùng chúng có hấp thụ quang tốt. Vì thế chúng tôi đã khảo sát ở các bớc sóng từ 220--230nm , xem tại vùng sóng nào chất phân tích có độ hấp thụ và tách ra khỏi nhau tốt nhất .
Điều kiện khảo sát:
Cột sắc kí pha ngợc : hypersil - ODS,5àm.
Dung môi pha động : metanol/acetolnitril/H2O (49:48: 3 theo v/v) Vòng bơm mẫu : 20àl
Tốc độ pha động : 1,4ml/ phút Băng hấp thụ : 0.05Aufs Vòng bơm mẫu : 20àl thế ghi của píc sắc kí : 20mV Tố c độ giấy : 2mm/phút
Dung dịch khảo sát : Hỗn hợp các clophenol 1ppm (từ mono cho đến penta).
Các kết quả nghiên cứu đợc trình bày trong bảng 3.1 và hình 3.2. Bảng 3.1 Quan hệ giữa chiều cao pic sắc ký và các bớc sóng hấp thụ
λ( nm) 225(nm ) 220 (nm) 230 (nm) 2. clophenol (mm 57mm 38,5mm 26mm 2.4 .diclophenol 31mm 21mm 16mm 2. 4.6 triclophenol 63mm 42mm 28,5mm 2.4.4.6tetraclophenol 13,5mm 17,5mm 12,5mm Penta.clophenol 10mm 7mm 4.5mm
Theo định luật lamber-beer thì độ hấp thụ quang của chất phân tích phụ thuộc vào nồng độ chất phân tích trong điều kiện đã chọn , độ hấp thụ đợc thể hiện ở chiều cao pic ( H) . Nếu trong cùng một điều kiện đã chọn thì ở bớc sóng (λ) nào có pic cao nhất thì tại đó chất phân tích sẽ có độ hấp thụ tốt nhất.
Tại mỗi bớc sóng chúng tôi khảo sát 2 lần để tìm độ lặp lạivà lấy giá trị trung bình của chiều cao pic. Nhìn vào kết quả bảng 3.1 và hình 3.2, ở bớc sóng
λ = 225nm của detector. Chúng tôi có 5 pic cân đối, có thể tách hoàn toàn và xác định đồng thời cả 5 chất. Cũng tại bớc sóng đó píc sắc kí của 5 chất có
chiều cao cao nhất. Vì thế xét trên 2 mặt là chiều cao pic và khả năng tách, chúng tôi chọn bớc sóng này λ = 225nm cho các nghiên cứu tiếp theo.
hình 3.1 Quan hệ giữa bớc sóng và chiều cao pic sắc kí
Pha động :metanol/H20/ Acetolnitril (49:48:3 V/V) Tốc độ pha động: 1.4ml/phút
Detector UV :225nm
Mẫu hỗn hợp: 1: 2clophenol; 3: 2.4Diclophenol; 2: 2.4.6Triclophenol; 4: 2.3.4.6Tetraclophenol:
5: Pentaclophenol