Vật liệu và dụng cụ cho ứng dụng phương pháp lai tại chỗ và

Một phần của tài liệu ứng dụng kỹ thuật lai tại chỗ (in situ hybridization) phát hiện tác nhân gây bệnh đục thân trên ấu trùng tôm càng xanh (macrobrachium rosenbergii de man, 1879) (Trang 34 - 36)

truyền thống

Vật liệu

Mẫu tôm thương phẩm và tôm postlarvae (giai đoạn 18 ngày đến 40 ngày tuổi) có nguồn gốc từ các ao nuôi tại các tỉnh An Giang, Đồng Tháp. Đối với tôm thương phẩm thì cố định mẫu mang, gan, phần cơ. Phải cố định nhanh khi tôm vẫn còn sống để đảm bảo cấu trúc mô học của mẫu bởi v ì khối gan tụy của tôm bị tiêu hủy rất nhanh sau khi tôm chết (sự ti êu hủy mô do chất dịch tự tiêu tiết ra từ tế bào gan tụy đã chết). Thu cả con để giữ mẫu.

Mẫu tôm postlarvae sau khi cảm nhiễm đã được cố định trong dung dịch Davidsson.

Dụng cụ và thiết bị

 Máy xử lý mẫu tự động

 Bình rót parafin

 Bộ phận làm lạnh mẫu

 Máy cắt mẫu microtome

 Nồi nước có chỉnh nhiệt độ

 Bàn ấm cố định mẫu trên lam kính

 Tủ ấm

 Máy nhuộm mẫu tự động

 Kính hiển vi quang học

 Khay thủy tinh rửa mẫu

 Nhiệt kế

 Gang tay y tế, khẩu trang, lame dương, lam, lamelle, cassette và n ắp, kép panh, khuôn inox, lọ chứa mẫu tôm, bút chì, micropipette, eppendoff, bình tam giác, ống đong, lọ thủy tinh đựng hóa chất, đầu type, đồng hồ hẹn giờ.

Hóa chất

Hóa chất phương pháp mô học truyền thống

 Cồn 50%, cồn 70%, cồn 80%, cồn 95% và cồn tuyệt đối 99,5%

 Chloroform

 Paraffin

 Xylene

 Thuốc nhuộm Hematoxylin và Eosin

 Keo dán Baume Canada

 Nước cất

Hóa chất phương pháp lai tại chỗ (ISH)

 Acid acetic glacial

 Nước cất hai lần đã khử ion và khử trùng.

 Proteinase

 Formaldehyde 37% và 100% (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

 NaCl – Sodium Chloride

 Na Citrate.2H2O – Sodium Citrate

 BSA – Bovine Serum Albumin, Fraction V

 Ficoll 400

 PVP – Polyvinyl Pyrrolidone 360

 Dextran sulfate

 Salmon sperm DNA

 Blocking reagent ≠ 11

 PVA – Polyvinyl Alcohol

 Levamisole

 NBT – Nitroblue Tetrazolium salt

 Muối toluidinium- 5 – bromo – 4-chloro-3-indoyl phosphate.

 Dimethylformamide 70% và 100%

 Methylgrenn

 Digoxigenin

 Anti – Digoxigenin Alkaline Phosphate conjugate

Một phần của tài liệu ứng dụng kỹ thuật lai tại chỗ (in situ hybridization) phát hiện tác nhân gây bệnh đục thân trên ấu trùng tôm càng xanh (macrobrachium rosenbergii de man, 1879) (Trang 34 - 36)