CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
3.3.2.Sắc ký cột định lượng hỗn hợp curcuminoid trong nước cái dưới lọc
- Khối lượng mẫu nạp: 0.2006g - Khối lượng silica gel: 14g
- Chiều cao silica gel trong cột: 15.5cm
- Tổng số phân đoạn hứng dưới cột: 180 phân đoạn - Thể tích mỗi phân đoạn: 10 ml
- Pha động: hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH với tỷ lệ tăng dần:CH2Cl2:CH3OH (100:0)
→ CH2Cl2:CH3OH (99.5:0.5) → CH2Cl2:CH3OH (99:1) → CH2Cl2:CH3OH (98:2)
→ CH2Cl2:CH3OH (95:5) → CH2Cl2:CH3OH (90:10)
Bảng 3.6. Kết quả cột định lượng hỗn hợp curcuminoid trong nước cái dưới lọc
Phân đoạn chính Phân đoạn nhỏ Tổng thể tích (ml) Thành phần Khối lượng (mg) % Khối lượng 1 1 - 94 940 cur 34.1 17.01 2 95 - 97 30 cur + DMC 13.9 6.94 3 98 - 107 100 DMC 54.0 26.92 4 108 10 DMC+BDMC 4.8 2.40 5 109 - 180 720 BDMC 78.5 39.15 Tổng 1800 185.4 92.42 Nhận xét
Bảng 3.6 cho thấy cột định lượng đã tách được các thành phần curcumin, DMC và BDMC từ hỗn hợp curcuminoid trong nước cái dưới lọc. Phần trăm khối lượng các phân
đoạn gồm 2 thành phần (curcumin+DMC hoặc DMC+BDMC) nhỏ chứng tỏ các chất
được tách tốt, ít bị chồng chập lên nhau. Khác với kết quả định lượng curucuminoid sau kết tinh, hàm lượng curcumin có trong nước cái giảm hẳn (17.01%) trong khi hàm lượng DMC và BDMC tăng rõ rệt: từ 7.13% lên 26.92% đối với DMC, và từ 3.44% lên 39.15%
methanol tốt hơn curcumin nên khi kết tinh lại, hai thành phần này tồn tại chủ yếu trong nước cái dưới lọc. Mặt khác, hiệu suất của cột định lượng này thấp hơn cột định lượng curcumin sau kết tinh, đó là do hàm lượng nhựa trong nước cái lớn. Những chất nhựa này không tan trong dung môi rửa cột nên nằm lại ở trên cột, làm hiệu suất tổng của quá trình chạy cột giảm.
Hình 3.5. Kết quả TLC của (A) hỗn hợp curcuminoid ban đầu ( mẫu M), (B) curcumin, (C) DMC, (D) BDMC.
Kết luận
Kết quả định lượng ba thành phần curcumin, DMC, BDMC có trong hỗn hợp curcuminoid sau kết tinh và nước cái cho thấy quá trình kết tinh hỗn hợp trong hệ dung môi methanol:nước đã tách hỗn hợp này thành hai phần riêng biệt. Thành phần bột curcuminoid sau kết tinh chứa nhiều curcumin và thành phần bột curcumioid trong nước cái dưới lọc chứa nhiều DMC và BDMC.
Hình 3.3 biểu diễn kết quả TLC của các đơn chất thu được từ sắc ký cột. Từng thành phần curcuminoid curcumin, DMC, BDMC đều cho từng chấm tròn trên sắc ký bản mỏng.
Đồng thời kết quả đo điểm chảy của các curcuminoid thành phần có khoảng biến thiên nhỏ (Curcumin: 179.5 – 183.5°C; DMC: 166.1 – 170.5°C; BDMC: 213.2 – 215.5°C),
Độ tinh khiết này còn được chứng minh bằng kết quả HPLC được biểu diễn trên hình 3.6. Thời gian lưu tương ứng của curcumin, DMC và BDMC là 10.635, 9.462 và 8.616 phút.
Hình 3.6. Sắc ký đồ HPLC của (A) curcumin; (B) DMC; (C) BDMC
Hình 3.7. (A) curcumin; (B) demethoxycurcumin (DMC); (C) bisdemethoxycurcumin (BDMC). 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 min 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0mV(x10) Detector A:422nm 9.462/1052887 (A) (B) (C) (A) (B) (C) Cur DMC BDMC
3.4. Phổ UV-Vis Hình 3.8. Phổ UV-Vis của curcumin.