CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.3.2.Sắc ký bản mỏng (TLC)
2.3.2.1. Mục đích
- Xác định hệ dung môi để chạy sắc ký cột.
- Kiểm tra thành phần, độ tinh khiết của các hỗn hợp, các phân đoạn sắc ký cột.
Sắc ký bản mỏng là sắc ký hấp phụ được tiến hành trên một bản mỏng, chất hấp phụ là silica gel hay oxyde nhôm cộng thêm bột bó để trải một lớp mỏng bám trên bề mặt tấm kính.
Phương pháp này có ưu điểm: hiệu ứng tách tốt, nhạy hơn các phương pháp khác, thời gian tiến hành nhanh, lượng chất phân tích nhỏ và dụng cụđơn giản.
2.3.2.3. Phương pháp thực hiện
Dụng cụ, hóa chất:
- Bình sắc ký bản mỏng.
- Bản mỏng silica gel 60 F254 (Merck)
9 Bản mỏng khảo sát hệ dung môi: 2x10cm.
9 Bản mỏng chạy các mẫu curcuminod sau kết tinh và mẫu sau khi qua cột sắc ký: 5x10cm.
Chiều cao triển khai bản mỏng: 8cm. - Dung môi:
9 dichloromethane 99.5% (Shantou Vilong Chemical Factory).
9 trichloromethane 99.7% (Shantou Vilong Chemical Factory).
9 methanol 99.9% (Công ty giải pháp hóa học Vina, quận Tân Bình, TP. Hồ Chí Minh).
9 acetone 99.7% (Công ty giải pháp hóa học Vina, quận Tân Bình, TP. Hồ Chí Minh).
Các bước tiến hành:
- Hoạt hóa silica gel bằng cách sấy bản mỏng ở nhiệt độ 110°C trong 1h, sau đó để
cân bằng ẩm trong bình hút ẩm 30 phút. - Chấm chất cần phân tích lên bản mỏng:
9 Hòa tan một ít mẫu curcumin vào một lượng vừa đủ acetone.
9 Vuốt ống mao quản bằng ngọn lửa đèn cồn, rửa ống mao quản 2 lần bằng acetone.
9 Dùng ống mao quản, hút một lượng mẫu đã hòa tan rồi chấm lên bản mỏng. Khoảng cách của vết chấm đến bờ dưới khoảng 1cm, các vết chấm cách hai bờ
(A)
y
x
(B)
hai bên bản 1cm và cách nhau 1cm. Độ lớn của vết chấm càng nhỏ, sự tách càng tốt.
- Triển khai bản mỏng:
9 Chuẩn bị bình sắc ký: rửa sạch, sấy khô, lót giấy lọc xung quanh thành.
9 Pha hệ dung môi khai triển cho vào bình, bão hòa khí quyển trong bình từ 15- 20 phút.
9 Đặt tấm bản mỏng vào bình, đậy nắp bình.
9 Theo dõi vạch dung môi chạy đến cách đầu trên của bản 1cm, dùng kẹp gắp bản mỏng ra.
9 Sấy nhẹ bản mỏng đểđuổi hết dung môi. - Phát hiện vết và tính trị số Rf :
9 Phất hiện vết qua màu sắc tự nhiên của vết.
9 Phun thuốc thử H2SO4 10% trong C2H5OH.
9 Tính trị số Rf
Gọi x: khoảng cách từđiểm xuất phát đến trung tâm vết.
y: khoảng cách từđiểm xuất phát đến mức dung môi.
ܴ ൌ ௫
௬
Hình 2.3. Sắc ký bản mỏng (TLC): (A) Triển khai bản mỏng (B) Cách đo khoảng cách trên bản mỏng sau khi triển khai để tính giá trị Rf .