CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.1.Mục đích nghiên cứu
- Tách 3 thành phần riêng biệt trong hỗn hợp curcuminoid thương phẩm. - Xác định độ tinh khiết, cấu trúc hóa học của mỗi thành phần.
- Xác định hoạt tính sinh học từng thành phần tách được. 2.2. Sơđồ tiến hành thực nghiệm Hình 2.1. Sơđồ tiến hành thực nghiệm. Bột curcuminoid Kết tinh lại Curcumin đã kết tinh Nước cái dưới lọc Sắc kí cột (CC) Sắc kí cột (CC) Curcumin DMC, BDMC Xác định cấu trúc, định lượng Xác định hoạt tính sinh học
Bột curcuminoid thương phẩm đầu tiên được kết tinh lại trong hệ dung môi methanol:nước. Sau đó, cả curcumin sau kết tinh và nước cái dưới lọc đểu được chạy sắc ký cột để tách lấy các curcuminoid thành phần. Qua sắc ký cột, curcuminoid sau kết tinh cho nhiều curcumin và curcuminoid trong nước cái cho nhiều DMC và BDMC. Các curcuminoid thành phần cô lập được xác định độ tinh khiết bằng TLC, đo điểm chảy, HPLC và xác định cấu trúc bằng đo phổ UV-Vis, MS, NMR. Hoạt tính sinh học của hỗn hợp curcuminod ban đầu và các curcuminoid thành phần được xác định bằng phương pháp DPPH và MDA. 2.3. Phương pháp thực hiện 2.3.1. Kết tinh 2.3.1.1. Mục đích - Làm sạch curcumin, loại bỏ một số tạp chất, các chất nhựa còn tồn tại trong nguyên liệu.
- Thu bột curcumin đã kết tinh có hàm lượng curcumin cao và nước cái dưới lọc có hàm lượng BMC, BDMC cao.
2.3.1.2. Nguyên tắc
Dựa vào tính tan khác nhau của các chất trong dung môi.
2.3.1.3. Phương pháp thực hiện
Hóa chất, nguyên liệu:
- Bột curcuminoid thô (Viện dược liệu, Bộ Y Tế, Hà Nội).
- Methanol 99.9% (Công ty giải pháp hóa học Vina, quận Tân Bình, TP. Hồ Chí Minh).
Hình2.2. Bột curcuminoid ban đầu
Phương pháp:
Bột curcuminoid thương phẩm được kết tinh lại 3 lần trong hỗn hợp methanol:nước. Các bước thực hiện như sau:
- Hòa tan hoàn toàn 500mg bột curcumiod thô bằng một lượng tối thiểu methanol ở
60°C.
- Thêm nước cất vào cho đến khi dung dịch vừa đục.
- Cho tiếp thêm một lượng nhỏ methanol khuấy cho đến khi dung dịch trong trở lại. - Giữ lạnh hỗn hợp ở 5°C trong 2h.
- Đem hỗn hợp sau kết tinh lọc chân không.
- Bột curcumin trên lọc được hút chân không, chuẩn bị cho giai đoạn tiếp theo. - Nước cái dưới lọc đem đi cô quay thành dạng bột khô, hút chân không, chuẩn bị
cho giai đoạn tiếp theo.