CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
3.3.1.Sắc ký cột định lượng hỗn hợp curcuminoid sau kết tinh
- Khối lượng mẫu nạp: 0.2007g. - Khối lượng silica gel: 14g.
- Chiều cao silica gel trong cột: 15.5cm.
- Tổng số phân đoạn hứng dưới cột: 183 phân đoạn. - Thể tích mỗi phân đoạn: 10 ml.
- Pha động: hệ dung môi CH2Cl2:CH3OH với tỷ lệ tăng dần: từ CH2Cl2 100% →
CH2Cl2: CH3OH (99.5:0.5) → CH2Cl2: CH3OH (99:1) → CH2Cl2: CH3OH (98:2)
→ CH2Cl2: CH3OH (95:5) → CH2Cl2: CH3OH (90:10).
Bảng 3.5. Kết quả cột định lượng hỗn hợp curcuminoid sau kết tinh.
Phân đoạn
chính Phân nhđỏoạn Tổng th(ml) ể tích Thành phần Khố(mg) i lượng % Khối lượng
1 1 - 88 880 curcumin 155.3 77.38 2 89 -94 60 cur + DMC 14.3 7.13 3 95 -140 460 DMC 14.3 7.13 4 141 - 149 90 DMC+BDMC 3.4 1.69 5 150 - 183 340 BDMC 6.9 3.44 Tổng 1830 194.2 96.76 Nhận xét
Hệ dung môi ban đầu để rửa giải là dichloromethane:methanol (100:0 v/v) khác với hệ
dung môi sắc ký bản mỏng vì hệ dung môi trong sắc ký cột phải có độ phân cực nhỏ hơn hệ dung môi sắc ký bản mỏng. Pha tĩnh trong sắc ký cột là silica gel có kích thước lớn hơn hạt silica gel tráng trên bản mỏng nên có bề mặt riêng nhỏ hơn bản mỏng, đồng thời
độ sít chặt của các hạt trên cột sắc ký nhỏ hơn trên bản mỏng và tỉ lệ mẫu/silica gel lớn hơn sắc ký bản mỏng. Chính vì vậy, nếu sử dụng dung môi chạy bản mỏng làm pha động trên sắc ký cột, tốc độ rửa giải sẽ quá nhanh dẫn đến việc tách các phân đoạn không hiệu quả. Do đó, cần chọn hệ dung môi có độ phân cực nhỏ hơn để giảm tốc độ rửa giải, tăng sự tương tác giữa các chất với nhau giúp quá trình phân tách các chất hiệu quả hơn.
Bảng 3.5 cho thấy cột định lượng đã tách được các thành phần curcumin, DMC và BDMC từ hỗn hợp curcuminoid trong nước cái dưới lọc. Phần trăm khối lượng các phân
đoạn gồm 2 thành phần (curcumin+DMC hoặc DMC+BDMC) nhỏ chứng tỏ các chất
được tách tốt, ít bị chồng chập lên nhau. Hỗn hợp curcumioid sau kết tinh có hàm lượng curcumin cao trong khi hàm lượng DMC rất ít (<10%) và đến BDMC thì không đáng kể.
Kết quả này hoàn toàn phù hợp với việc dựđoán thành phần hỗn hợp curcuminoid sau kết tinh bằng TLC (hình 3.3) và HPLC (hình 3.4)