CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM
2.3.4. Xác định cấu trúc
2.3.4.1. Phổ UV-Vis
Mục đích: Xác định bước sóng hấp thu cực đại và kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm.
Nguyên tắc: Khi phân tử hấp thu bức xạ tử ngoại hoặc khả kiến thì những electron hóa trị
của nó bị kích thích và chuyển từ trạng thái cơ bản lên trạng thái kích thích và thu được phổ tử ngoại khả kiến (Ultraviolet and visible Spectra, UV-Vis).
Phương pháp thực hiện: pha các mẫu curcumin tinh, DMC tinh, BDMC tinh với nồng độ
0.6x10-5mol/l. Tiến hành đo phổ UV-Vis.
Máy đo: 6505 UV-Vis Spectrophotometer JENWAY.
Hình 2.5. Dung dịch curcumin, DMC, BDMC dùng đểđo phổ UV-Vis.
2.3.4.2. Đo điểm chảy
Mục đích: xác định độ tinh khiết của curcumin, DMC, BDMC thu được.
Máy đo: Electrothermal 9100.
2.3.4.3. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H NMR, 13 C NMR) Phổ NMR được phân tích tại Viện Hóa học Việt Nam, Hà Nội.
Dung môi hòa tan: DMSO.
Thông số máy:máy Bruker av 500 tần số 500MHz.
2.3.4.4. Phổ MS
Phổ MS được phân tích tại Viện Hóa học Việt Nam, Hà Nội.
2.3.4.5. Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
Mục đích: Khảo sát thành phần của curcuminoid ban đầu, curcumin sau kết tinh và xác
đinh độ tinh khiết của curcumin, DMC, BDMC tách được từ sắc ký cột.
Nguyên tắc:
Phân tách các chất dựa trên sự tương tác khác nhau của các chất với pha tĩnh, pha tĩnh với pha động, các chất với pha động.
Phương pháp thực hiện:
Phổ HPLC được phân tích tại Trung tâm Đào tạo và Phát triển Sắc ký, Tp. Hồ Chí Minh. - Chuẩn bị mẫu thử nghiệm: Cân m(g) mẫu thử. Chuyển phần mẫu thử vào bình định
mức 10ml. Định mức bằng acetonitrile, lắc đều. Đánh siêu âm khoảng 5 phút. Pha loãng mẫu 20 lần. Lọc qua giấy lọc 0.45µm. Dung dịch sau lọc được tiêm vào máy.
- Tiến hành phân tích trên máy HPLC:
9 Cột sắc ký: cột pha đảo C18 (250x4.6mm, 5cm).
9 Nhiệt độ cột: 40°C.
9 Pha động: ACN:H3PO4 0.05%/ 55:45 (v/v).
9 Tốc độ dòng: 0.8ml/ phút.
9 Bước sóng cài đặt cho đầu dò UV-Vis là 422nm.