* Thuốc thử Biure (cũn gọi là tỏc nhõn Gornal).
Cõn 5g CuSO4.5H2O hoà tan trong 495ml H2O ta được dung dịch A (dung dịch 5g CuSO4.5H2O 1%).
Cõn 10g KNaC4H4O6.4H2O (Kali Natri tactrat) hoà tan trong 490ml H2O ta được dung dịch B (dung dịch KNaC4H4O6.4H2O 2%).
Cõn 20.5g Na2CO3 và 4g NaOH hoà tan trong 1000ml H2O ta được dung dịch C (dung dịch Na2CO3 2% trong NaOH 0.1N).
Pha thuốc thử Biure (chỉ pha trước khi dựng):
Lấy 1ml dung dịch A + 1ml dung dịch B + 98ml dung dịch C.
Thuốc thử Biure cú màu xanh nhạt. Thuốc thử Biure khụng dựng được trong mụi trường cú NH4+ vỡ NH4
+
tạo phức với Cu2+ khụng màu, bền nờn khụng tạo phức sinh màu được với polypeptit.
* Thuốc thử Folin-Ciocalteux.
Hoà tan 100g Na2VO4.2H2O và 25g Na2MoO4.2H2O vào 800ml nước cất. Thờm 50 ml dung dịch H3PO480% và 100 ml HCl đậm đặc. Đun sụi hỗn hợp trong bỡnh cầu đỏy trũn dung tớch 2000 ml với ống sinh hàn ngược trong vũng 10 giờ. Cú thể đun ngắt quóng, khụng cần phải đun liờn tục, nhưng phải đun sụi đủ 10 giờ. Sau khi đun xong thờm vào hỗn hợp 150g Li2SO4, 50 ml nước cất và 5 giọt nước Br2. Đun sụi 15 phỳt khụng cú ống sinh hàn ngược để loại trừ lượng Br2 dư. Dung dịch thuốc thử phải cú màu vàng, khụng được cú màu xanh. Nếu thuốc thử cú màu xanh thỡ phải xử lớ với Brụm lần thứ hai. Sau khi làm nguội dung dịch, thờm nước cất cho tới vạch mức trong bỡnh định mức dung tớch 1000 ml.
Xỏc định nồng độ của thuốc thử bằng cỏch chuẩn độ dung dịch Folin - Ciocalteux pha loóng 10 lần với dung dịch NaOH 0.1N (dựng chất chỉ thị là phenolphtalein).
Bảo quản thuốc thử Folin trong bỡnh thuỷ tinh màu, để trong tủ lạnh. Sau 2-3 thỏng dung dịch ngả màu xanh thỡ thờm vài giọt Brụm và lại đun sụi 15 phỳt, dung dịch cú màu vàng trở lại. Trước khi dựng, pha loóng thuốc thử bằng nước cất sao cho nồng độ thuốc thử bằng 1N.
Protein hiện màu tớm - xanh trong mụi trường kiềm do sự oxy hoỏ của volframat và molipđat cỏc gốc tirozin và triptophan trong protein.
Cỏc chất ure (0.5%), guanidin (0.5%), vonphramat natri (0.5%), sunfat natri (1%), nitrat natri (1%), clorat (0.5%), tricloaxetat (0.5%), rượu etylic (5%), ete (5%), axeton (0.5%), sunfat kẽm (0.1%), hydroxit bari (0.5%), sunfatamon (0.15%) - khụng làm giảm màu của phản ứng. Glixin (0.5%) làm giảm đến 50% màu của phản ứng. Đệm phosphat từ 0.1M trở lờn gõy kết tủa phản ứng màu.
* Pha dung dịch đệm phosphat cú pH=8.
Cõn 11.8660g Na2HPO4 hoà tan trong 1000ml H2O ta được dung dịch E. Cõn 9.0780g KH2PO4 hoà tan trong 1000ml H2O ta được dung dịch F. Tiếp theo, dựng pipet lấy chớnh xỏc 5.5ml dung dịch F cho vào bỡnh định mức 100ml, thờm dung dịch E vào bỡnh cho tới vạch mức ta được dung dịch đệm phosphat cú pH=8.