- Mẫu tế bào được nuôi cấy cảm ứng lượng lớn 200 ml bằng IPTG với nồng
3.6.2.ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng IPTG lên khả năng biểu hiện gen fljB
20o 25 30 37 đc20o 25 30 37 đc
3.6.2.ảnh hưởng nồng độ chất cảm ứng IPTG lên khả năng biểu hiện gen fljB
hiện gen fljB
Bên cạnh điều kiện về nhiệt độ thì nồng chất cảm ứng cũng là một trong những điều kiện quan trọng quyết định khả năng biểu hiện của gen ngoại lai. Hơn nữa đây là một cơ chất đắt tiền với điều kiện thí nghiệm của Việt Nam hiện nay, đòi hỏi việc xác định nồng độ IPTG tối thích cho quá trình biểu hiện protein ngoại lai là công việc cần thiết và có ý nghĩa thiết thực với quá trình sản xuất sau này.
Chúng tôi tiến hành khảo sát khả năng biểu hiện của protein fjlB ở các nồng độ chất cảm ứng (0 mM, 0,05 mM, 0,1 mM, 0,2 mM, 0,4 mM, 0,6 mM, 0,8 mM, 1 mM, 2 mM), ở 30oC và thời gian cảm ứng là 4h. Kết quả được thể hiện trên điện di polyacrylamit 12,6% hình 3.12.
Protein tái tổ hợp FljB 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 kDa 66,2 45 35 25 18,8
Hình 3.15. Phân tích sản phẩm protein của tế bào E. coli BL21 mang gen fljB trên gel
polyacrylamit 12,6%
Đường chạy số 1- 9: Protein tái tổ hợp thu được sau khi cảm ứng IPTG ở các nồng độ: 0 mM, 0,05 mM, 0,1 mm, 0,2 mM, 0,4 mM, 0,6 mM, 0,8 mM, 1mM, 2mM tương ứng của chủng E. coli BL21 mang plasmit pETfljB
Kết quả điện di cho thấy khi protein không cảm ứng IPTG thì tốc độ sinh trưởng của E. coli BL21 tăng lên, tổng hợp được nhiều protein thể hiện có nhiều băng protein. Khi cảm ứng ở nồng độ thấp 50 ỡM sự sinh trưởng của chúng giảm xuống và fljB bắt đầu được biểu hiện. Khi cảm ứng với nồng độ cao hơn 100 ỡM protein fljB biểu hiện tốt hơn. Điều đó được thể hiện trên điện di đồ là một băng đậm, rõ nét với kích thước đúng như dự đoán khoảng 66 kDa. Lượng protein fljB tái tổ hợp được tổng hợp được ổn định ở các nồng độ IPTG khác nhau 0,05 mM, 0,1 mM, 0,2 mM, 0,4 mM, 0,6 mM, 0,8 mM, 1 mM, 2 mM. Như vậy ta có thể thu được lượng protein tái tổ hợp fljB tương đối lớn mà chỉ cần sử dụng một lượng chất cảm ứng rất nhỏ (0,1 mM). Đây là một là một trong những yếu tố quan trọng góp phần làm giảm chi phí cho quá trình sản xuất sau này. Nồng độ IPTG 0,1 mM được lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo.