pH của đất vùng rễ dao động từ 7,0 – 7,2 (phụ lục 1) - Rửa thật sạch đất bám ở rễ, thân, lá và trái
- Sau đó cắt rễ, thân và lá thành những đoạn nhỏ 2 - 3cm rồi làm khô chúng bằng giấy hút ẩm.
- Tiếp tục khử trùng mẫu bằng dung dịch ethanol 70% (trong 30 giây), dung dịch H2O2 3% (trong 3 phút) và rửa lại 4 lần bằng nước cất vô trùng.
Để kiểm tra vi sinh vật còn sót lại trên bề mặt rễ, thân, lá và trái: hút 50µL nước cất rửa mẫu lần cuối cùng trải vào môi trường PDA và ủ ở 30oC. Sau 24h kiểm tra xem có vi sinh vật nào phát triển không. Nếu không có vi sinh vật nào phát triển, chứng tỏ mẫu đã khử trùng bề mặt sạch và những vi khuẩn phân lập được là vi khuẩn nội sinh trong rễ, thân, lá và trái của Diệp hạ châu.
- Sau khi khử trùng mẫu xong, cắt chúng thành những đoạn thật nhỏ rồi đem nghiền mịn trong cối cùng với 1mL nước cất vô trùng.
- Lấy 10µL dung dịch nghiền ở trên cấy vào ống nghiệm chứa môi trường PDA bán đặc không bổ sung đạm rồi đem ủ ở 30oC để vi khuẩn sinh trưởng và phát triển.
- Sau khoảng 2 - 3 ngày nuôi, khi thấy môi trường nuôi vi khuẩn xuất hiện một lớp màng mỏng trắng đục (pellicle) cách mặt môi trường bán đặc khoảng 3 - 6mm, lấy 5µL dung dịch nuôi vùng này cấy sang đĩa petri chứa môi trường PDA đặc rồi tiếp tục đem ủ ở 30oC trong tủ ủ để vi khuẩn tiếp tục sinh trưởng và phát triển.
- Tiếp tục theo dõi thường xuyên sự tăng trưởng của vi khuẩn và phân lập đến khi vi khuẩn ròng.