hơn 250 để tính.
d. Tính toán
Tổng vi sinh hiếu khí (TPC)
Trong đó:
+ N : Tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa + n1 : Số đĩa ở độ pha loãng f1
+ ni : Số đĩa ở độ pha loãng fi
+ V1 : Thể tích mẫu cấy ở độ pha loãng f1 + Vi : Thể tích mẫu cấy ở độ pha loãng fi + fi : Độ pha loãng.
3.4.2 Định lượng Coliforms trong sữa tươi tiệt trùng bằng phương pháp đếm khuẩn lạc khuẩn lạc
3.4.2.1 Nguyên tắc
Để định lượng Coliforms cần cấy một lượng mẫu xác định trên môi trường thạch chọn lọc, sau khi ủ ở 370C trong khoảng thởi gian 24h, đếm số lượng khuẩn lạc
Coliforms điển hình. Xác định lại bằng các phản ứng đặc trưng. Môi trường chọn lọc là môi trường chứa lactose, đây là nguồn carbon duy nhất, đồng thời trong môi trường còn chứa muối mật là tác nhân chỉ chọn lọc cho vi khuẩn gram âm. Khẳng định các vi khuẩn cho hình dạng khuẩn lạc điển hình bằng môi trường canh chọn lọc như Brilliant Green Bile Lactose broth (BGBL).
3.4.2.2 Quy trình phân tích
a. Phân lập
Hút mẫu vào 2 đĩa petri trống vô trùng (mỗi đĩa 1ml), đổ vào mỗi đĩa 5ml môi trường TSA lắc đều để ở nhiệt độ phòng khoảng 15 - 30 phút, đỗ tiếp vào mỗi đĩa 10 - 15ml môi trường VRB để đông đặc.
N
TPC ( CFU/ml) = --- n1.V1.f1+...+ni.Vi.fi
b. Nuôi ủ
Lật ngược đĩa và ủ ở 370C trong 24h. c. Đọc kết quả
Chọn và đếm tất cả các khuẩn lạc có màu đỏ đến đỏ sậm có quầng tủa muối mật đường kính > 0,5mm.
d. Khẳng định
Chọn 5 khuẩn lạc đặc trưng cấy sang 5 ống môi trường BGBL có chứa ống durnham, ủ ở 370C trong 24h.
e. Đọc kết quả
Đếm số ống nghiệm BGBL có sinh khí (+)
f. Tính toán
- Tỷ lệ xác nhận R
Số khuẩn lạc sinh hơi trong BGBL R = --- Số khuẩn lạc đã cấy - Số lượng Coliforms Trong đó: + N: Tổng số khuẩn lạc đếm được + n : Số đĩa
+ V: Thể tích mẫu cấy vào mỗi đĩa + f : Độ pha loãng (f = 1).
+ R: Tỷ lệ xác nhận.
N
C ( CFU/ml) = --- . R n.V.f