v Hóa chất khử trùng: Javel nồng độ 1.5%, 3.0%, 5.0%
v Chất điều hòa tăng trưởng thực vật: NAA (1-naphthaleneacetic) và TDZ (thidiazuron).
v Hóa chất dùng trong chuyển gen:
•Acetosyringone tan trong cồn, pha trong nước cất, lọc vô trùng,
•Cefotaxime tan trong nước cất, lọc vô trùng, có tính diệt vi khuẩn.
•Hygromycin - là loại kháng sinh phổ biến aminoglycosidic, không bền với
điều kiện bên ngoài, bị phân hủy bởi ánh sáng và nhiệt độ. Vì thế, quá trình chọn lọc hygromycin chỉ diễn ra từ 2-3 tuần. sau đó cần thay mới môi trường.
v Môi trường MS (Murashige và Skoog,1962) (phụ lục 1)
v Môi trường B5 (phụ lục 1)
v Môi trường khảo sát sự tái sinh từ lá cẩm chướng:
10 môi trường tiến hành khảo sát sự tái sinh từ lá cẩm chướng là TS0 (đối chứng), TS1, TS2, TS3, TS4, TS5, TS6, TS7,TS8, TS9, TS10. Môi trường MSB5 là môi trường MS có thay vitamin môi trường MS bằng vitamin môi trường B5.
•TS0: MSB5 + 0.0 mg/l TDZ + 0.0 mg/l NAA (môi trường đối chứng).
•TS1: MSB5 + 0.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA
•TS2: MSB5 + 0.5 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA
•TS4: MSB5 + 1.5 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA •TS5: MSB5 + 2.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA •TS6: MSB5 + 0.0 mg/l TDZ + 0.2 mg/l NAA •TS7: MSB5 + 0.5 mg/l TDZ + 0.2 mg/l NAA •TS8: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.2 mg/l NAA •TS9: MSB5 + 1.5 mg/l TDZ + 0.2 mg/l NAA •TS10: MSB5 + 20 mg/l TDZ + 0.2 mg/l NAA
v Môi trường khảo sát nồng độ chất chọn lọc: môi trường tái sinh TS3 có bổ
sung thêm hygromycin với nồng độ lần lượt là 0, 4, 8, 12, 16, 20 mg/l.
•KS0: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 0 mg/l hygromycin (môi trường đối chứng) •KS1: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 4 mg/l hygromycin. •KS2: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 8 mg/l hygromycin. •KS3: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 12 mg/l hygromycin. •KS4: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 16 mg/l hygromycin. •KS5: MSB5 + 1.0 mg/l TDZ + 0.1 mg/l NAA + 20 mg/l hygromycin.
v Môi trường chọn lọc cây chuyển gen: môi trường tái sinh có bổ sung thêm 500µl/l cefotaxime, hygromycin với nồng độ lần lượt là 4 mg/l. , 8 mg/l., 12 mg/l.
v Môi trường LB (phụ lục1) bổ sung kháng sinh kanamycin nồng độ 50 mg/l dùng để chọn lọc và giữ dòng A. tumefaciens mang plasmid tái tổ hợp.