L ỜI MỞ ĐẦU
4.3.2. Lên men bề mặt không vô trùng
Trong điều kiện thiếu trang thiết bị hoàn chỉnh để lên men chìm, người ta
có thể sử dụng phương pháp lên men bề mặt không vô trùng để thu nhận chế
phẩm diệt côn trùng từ nấm, vi khuẩn.
Khâu khó khăn nhất trong quy trình này là hạn chế sự nhiễm tạp của vi
khuẩn lạ. Do môi trường không được hấp khử trùng. Để khắc phục ta có thể đun môi trường ở 100⁰C trong 30 phút, khi nguội cho thêm kháng sinh streptomycine 0.01%.
Các bước lên men bề mặt
Bước 1 : Nấm nuôi trong ống thạch nghiêng hay đĩa pertri 7-10 ngày ở
nhiệt độ 28 - 30 oC
Bước 2 : Lấy bào tử
Bước 3 : Cho vào các chậu thủy tinh lớn có lớp môi trường dịch 1 – 1,5 cm (chậu phải được sấy ở 100oC trong 30 phút, môi trường dịch nấu sôi ở 100oC trong 30 phút).
Bước 4 : Nuôi 12 ngày ở nhiệt độ 25 - 30oC.
Bước 5 : Vớt thảm nấm có bào tử, đồng thời cuốn tròn mặt bào tử ở trong.
Bước 6 : Thấm cho ráo nước và bổ sung chất phụ gia.
Bước 7 : Nghiền nhỏ bằng máy nghiền.
Bước 8 : Sấy khô ở 30 - 35oC.
Sơ đồ làm rõ cho các bước:
Sơ đồ 3.2. Sơ đồ lên men bề mặt không vô trùng
Nấm Lấy bào tử Vào chậu Nuôi Vớt thảm Nghiền Sấy Chế phẩm
Ngoài ra để đảm bảo được sự phát triển áp đảo của chủng vi sinh vật nuôi cấy, cần tuân thủ các nguyên tắc sau :
- Môi trường sau khi đun 100oC trong 30’, được để nguội và cấy bào tử
vào, số bào tử này sẽ khuếch tán thành một màng mỏng khắp bề mặt môi trường.
Trong thời gian nhất định chúng sẽ ngăn cản không cho không khí khuếch tán vào môi trường. Do vậy cũng làm hạn chế sự tạp nhiễm của các vi sinh vật lạ.
Lượng bào tử cấy vào đủ để áp đảo vi sinh vật lạ là 1- 2 tỉ bào tử/cm3
- pH của môi trường trong khoảng 5.0 - 5.5 thích hợp cho sự phát triển của
nấm, vi khuẩn.