VI SINH VẬT TRONG MÔI TRƯỜNG
2.Nấm men (Yeasts)
Nấm thuộc loại tế bào eukaryota và có thể tồn tại dưới dạng đơn hoặc đa bào. Chúng là loại dị dưỡng và lấy dinh dưỡng nhờ hấp thụ các vật chất hữu cơ hoà tan thông qua vách tế bào và màng nguyên sinh chất. Nấm (ngoại trừ nấm men) là VSV hảo khí. Nấm men đơn bào, nấm mốc đa bào và các loài vĩ mô như nấm mũ thuộc giới nấm. Nấm thường ưa điều kiện axit, chịu áp suất cao và độ ẩm thấp hơn vi khuẩn. Chúng có kích thước tế bào và hình thái chi tiết lớn hơn vi khuẩn. Ngược lại với các đặc trưng của vi khuẩn, các đặc trưng cơ sở như chi tiết hình thái và tế bào được sử dụng để phân loại nấm, với sự tham dự chút ít của các đặc trưng thứ cấp như trao đổi chất và thành phần kháng nguyên. Nấm có cấu trúc phức tạp hơn vi khuẩn nhưng lại trao đổi chất thay đổi ít hơn.
Nấm men là loại nấm đơn bào, không có thể hình sợi, có dạng hình cầu hoặc ovan điển hình. Nấm men được phân bố rộng rãi trong tự nhiên, thường tìm thấy trên hoa quả và lá cây như lớp phủ ngoài dạng bột màu trắng. Nấm men sinh sản vô tính bằng nảy chồi, là quá trình trong đó một tế bào mới hình thành một u lồi (nảy chồi) từ tế bào mẹ. Trong nhiều trường hợp, các chồi không thể tự tách ra, một chuỗi ngắn các tế bào được gọi là dạng giả khuẩn ty. Khi nấm men sinh sản hữu tính, chúng có thể sinh ra một hoặc vài loại bào tử giới tính. Loại bào tử giới tính được sản xuất bởi một loài nấm men được sử dụng để phân loại như sự phân chia (ngành). Hoạt động trao đổi chất cũng được sử dụng để xác định các giống nấm men.
Nấm men là loại yếm khí không bắt buộc. Hoạt động trao đổi chất của
chúng thường được sử dụng trong nhiều quá trình lên men công nghiệp. Nấm
men thường được dùng để chuẩn bị nhiều loại thức ăn gồm có bánh mì, đồ uống như rượu vang và bia.
Trong phòng thí nghiệm, môi trường lựa chọn thạch Sabouraud thường được sử dụng để phân lập nấm men. Thạch Sabouraud có các chất dinh dưỡng đơn giản (glucoza và pepton) và pH thấp, hạn chế sự sinh trưởng của hầu hết các sinh vật khác. Rất nhiều kỹ thuật hữu ích với vi khuẩn có thể áp dụng với nấm men.
2.1. Vật liệu
ống lên men glucoza ống lên men saccharoza
Đĩa Petri chứa môi trường Sabouraud
Chai chứa môi trường cao nấm men -glucoza
Gạc bông khử trùng, lam kính, ống nghiệm, xanh methylen, bình cầu, hoa quả hoặc lá cây. 2.2. Dịch nuôi cấy Men bánh mì Rhodotorula rubra Candida albicans Saccharomyces cerevisiae 2.3. Thủ tục tiến hành 2.3.1. Nấm men
a. Nhẹ nhàng hoà một ít men bánh mì trong một ít nước ấm trong ống
nghiệm để tạo ra dung dịch trắng đục.
b. Mỗi cặp sinh viên sẽ sử dụng một loại dịch nuôi cấy nấm men và dịch men bánh mì
- Chia một đĩa môi trường Sabouraud thành hai nửa. Ria cấy dịch nấm
men đã biết trên nửa môi trường và men bánh mì ở nửa còn lại.
- Nhiễm mỗi loại dịch VSV vào một ống lên men glucoza và một ống lên
men saccharoza.
c. Nuôi tất cả các môi trường ở 35oC tới khi xuất hiện dấu hiệu sinh trưởng.
d. Nhỏ một giọt xanh methylen vào một ít mỗi loại dịch nuôi cấy. Ghi lại kết quả quan sát được.
e. Sau khi nấm men sinh trưởng, ghi lại kết quả. Kiểm tra dịch nấm men không nuôi cấy và xác định kết quả.
2.3.2. Phân lập nấm men
a- Cắt hoa quả và lá cây thành các miếng nhỏ. Đặt chúng trong chai môi
trường cao nấm men-glucoza. Đậy miệng chai bằng một quả bóng. Nuôi ở nhiệt độ phòng tới khi xuất hiện sự sinh trưởng. Ghi lại sự xuất hiện của cả hai loại mẫu sau khi nuôi cấy.
b- Chia đĩa môi trường Sabouraud thành 2 nửa. Mỗi loại mẫu nuôi cấy trên một nửa đĩa.
+ Lau bề mặt cái kéo cắt mẫu bằng miếng gạc vô trùng. Đặt miếng gạc trên nửa đĩa môi trường. Một số vi khuẩn sẽ mọc trên môi trường này.
+ Sử dụng que cấy vô trùng cấy ria một vòng que cấy dịch chiết từ chai vừa chuẩn bị ở phần a.
c. Đặt đĩa cấy đảo ngược, nuôi ở nhiệt độ phòng cho tới khi sự sinh trưởng xuất hiện. Chuẩn bị dịch thử với xanh methylen từ các khuẩn lạc khác nhau. Ghi lại kết quả.