IV. ENZYM TRONG TRAO ĐỔI LƯU HUỲNH
3. Xác định sinh khối nitơ của vi sinh vật đất
Sau khi xông hơi bằng cloroform, mẫu đất được chiết bằng dung dịch kali sunphat. Nitơ tổng số trong dịch lọc được xác định và biến đổi sang nitơ sinh
khối (Brookes và cs, 1985). Nitơ tổng số được xác định theo phương pháp
Kjeldahl.
3.1. Vật liệu, hoá chất và thuốc thử
Các vật liệu, hoá chất, dụng cụ và thuốc thử chuẩn bị như xác định cacbon sinh khối vi sinh vật ở trên.
3.2. Thủ tục tiến hành 3.2.1. Chiết - xông hơi 3.2.1. Chiết - xông hơi
Xông hơi 150-200g mẫu đất ẩm bằng cloroform trong 24h giống như
phân tích cacbon sinh khối ở trên. Sau đó (ngược với kỹ thuật chiết-xông hơi trên, cloroform không được tách ra khỏi mẫu), trộn đất xông hơi với dung dịch kali sunphat theo tỉ lệ 1:4, lắc 30 phút và lọc làm mẫu phân tích (3 lần lặp lại). Tiến hành tương tự với mẫu đối chứng không xông hơi (3 lần lặp lại).
Tiến hành phân tích lượng nitơ tổng số trong dịch lọc ngay theo phương pháp Kjeldahl. Có thể cất giữ dịch lọc ở 4oC cho đến khi phân tích.
3.2.2. Phân tích nitơ theo phương pháp kjeldahl
- Dụng cụ, hoá chất bổ sung:
+ Bình Kjeldahl (250ml), bộ cất đạm Kjeldahl + Axit sunfuric H2SO4 (p = 1.84 g/ml)
+ H2SO4 0,05M
+ Hỗn hợp xúc tác: 100g K2SO4 + 10g CuSO4 + 1g Se, nghiền nhỏ + NaOH 32% (w/v)
+ Axit boric 2% (w/v)
+ Dung dịch chỉ thị (ví dụ xanh bromcresol, đỏ metyl)
- Tiến hành: Cho 0,5g hỗn hợp xúc tác và 20ml H2SO4 đặc vào bình dịch
lọc, công phá cho đến khi thu được dung dịch trong, để nguội ở nhiệt độ phòng. Cho 10ml axit boric và vài giọt chỉ thị vào bình hứng dịch chưng cất. Sau khi thêm xút dư tiến hành chưng cất 3-20 phút để chuyển hoàn toàn NH3 vào bình chứa axit boric và chỉ thị.
Xác định N-NH4 bằng chuẩn độ với H2SO4 0,05M (điểm chuẩn độ là dung
dịch chuyển từ xanh sang hồng. Lượng nitơ trong mẫu được tính theo công thức sau:
(S-C).1,4.100.100
= %N A. SW.1000 Trong đó:
C: Lượng axit H2SO4 0,05M dùng cho đối chứng (ml)
1,4: Hệ số chuyển đổi (1ml H2SO4 0,05M tương ứng với 1,4 mgN)
100: Lượng dịch tiêu thụ (ml)
A: ước số dịch tiêu thụ (ml)
SW: Lượng đất ban đầu
100.1000-1: Hệ số chuyển đổi (%, w/w)
3.3. Tính kết quả
Nitơ sinh khối vi sinh vật được tính theo phương trình: (S-C)
= μg N.g-1 dm 0,54
Trong đó:
S: Giá trị của mẫu (μg N-NH4.g-1dm) C: Giá trị đối chứng (μg N-NH4.g-1dm)
0,54: Hệ số KEN (mối quan hệ giữa nitơ sinh khối VSV và nitơ tổng số
trong đất).
* Câu hỏi ôn tập: Bài số 17
1 Sinh khối VSV có môi quan hệ mật thiết với sản phẩm nuôi cấy và môi trường lên men?
2. Các phương pháp thử và các loại thuốc thử, các công thức tính cho từng nhóm VSV?
2. Tính toán kết quả thí nghiệm của từng loại sinh khối cho từng nhóm VSV chuyên tính?
Bài số 18
SINH TRƯỞNG CỦA VI SINH VẬT
Mục đích yêu cầu:
+ Xác định các điều kiện nuôi cấy cho mỗi loại VSV: hảo khí, yếm khí bắt buộc, yếm khí không bắt buộc.
+ Hiểu rõ 3 phương pháp nuôi cấy vi khuẩn yếm khí.
+ Xác định 4 pha của đường cong sinh trưởng của một vi khuẩn điển hình.
Nội dung kiến tập:
+ Nuôi cấy vi khuẩn yếm khí.
+ Đo độ đục sinh trưởng của vi khuẩn. Giải thích số liệu sinh trưởng của vi khuẩn trên đồ thị.
+ Xác định ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự sinh trưởng của VSV.
1. Nguyên lý chung
Vi sinh vật có những yêu cầu về dinh dưỡng, lý học, hoá học và môi
trường phải được đáp ứng để sinh trưởng và phát triển. Kiến thức về các điều kiện cần thiết cho sinh trưởng của VSV có thể giúp dễ dàng nuôi cấy các VSV và điều khiển các VSV không mong muốn.
Năm 1861, Jean Baptiste Dumas đã trình bày một báo cáo tới viện hàn lâm Pasteur. Trong bài báo này, ông bắt đầu:
“ Sự tồn tại của lớp trùng mao có các đặc trưng của các men là đáng chú
ý, nhưng một đặc trưng cần được quan tâm nhiều hơn là các động vật nhỏ trùng mao này sống và nhân lên vô hạn trong sự vắng mặt của lượng không khí nhỏ nhất hoặc oxy tự do…”
Khi chúng ta nói không khí là một yêu cầu sinh trưởng, chúng ta cần xem xét lượng oxy trong không khí. Hơn thế nữa, khi chúng ta nhắc đến oxy, chúng ta thường muốn nói đến oxy phân tử (O2) đóng vai trò là một nguồn cung cấp điện tử trong hô hấp hảo khí.
Các điều kiện vật lý trong môi trường ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của
VSV là nhiệt độ, áp suất thẩm thấu và pH.