Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh

Một phần của tài liệu Tuyển chọn và nghiên cứu hoạt tính sinh học của một số chủng xạ khuẩn phân lập ở núi Pháo - Đại Từ - Thái Nguyên (Trang 31 - 32)

* Phương pháp thỏi thạch

Đây là phương pháp để sơ tuyển xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh. Xạ khuẩn được nuôi cấy trên môi trường Gause 1, Gause 2, hoặc ISP4 trong đĩa Petri sau 5 - 7 ngày. Nuôi cấy VSVKĐ trên các môi trường thích hợp trong các đĩa Petri (vi khuẩn nuôi trên môi trường MPA, nấm mốc nuôi trên môi trường khoai tây). Dùng khoan nút chai khoan các thỏi thạch có xạ khuẩn được nuôi cấy từ 5 - 7 ngày, sinh trưởng tốt, không bị nhiễm. Đặt các thỏi thạch lên bề mặt môi trường thạch đĩa đã cấy VSV kiểm định. Sau đó đặt các đĩa vào tủ lạnh 40C trong vòng 4 - 5 giờ để chất kháng sinh khuếch tán rồi nuôi ở 28 - 300C. Đọc kết quả sau 24 giờ đối với vi khuẩn kiểm định, 48 - 72 giờ đối với nấm kiểm định.

Hoạt tính kháng sinh của mỗi chủng xạ khuẩn được xác định theo kích thước vòng vô khuẩn: D - d (mm), trong đó D là đường kính vòng vô khuẩn, d là đường kính của thỏi thạch.

23

* Phương pháp đục lỗ

Đây là phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh của dịch lên men. Xạ khuẩn được nuôi lắc trong môi trường Gause 1 dịch thể trên máy lắc tròn với tốc độ 220 vòng/phút trong 5 - 7 ngày, thu dịch kháng sinh thô bằng cách ly tâm dịch lên men ở 5000 vòng/phút trong 10 phút. Dùng khoan nút chai khoan lỗ trên bề mặt thạch đã cấy VSV kiểm định trong các đĩa Petri. Nhỏ vào mỗi lỗ khoan 0,1 ml dịch kháng sinh cần thử. Các bước tiếp theo tiến hành như phương pháp thỏi thạch [7, 9, 14].

Một phần của tài liệu Tuyển chọn và nghiên cứu hoạt tính sinh học của một số chủng xạ khuẩn phân lập ở núi Pháo - Đại Từ - Thái Nguyên (Trang 31 - 32)