Quỏ trỡnh điện di trong mao quản là sử dụng điện ỏp rất cao đặt vào hai đầu mao quản tạo ra điện trường E tỏc dụng trực tiếp lờn cỏc ion để di chuyển chỳng về cỏc cực . Thế V này tạo ra lực điện trường E trong mao quản, nú điều khiển, duy trỡ sự điện di và là một trong cỏc yếu tố chớnh quyết định kết quả của sự điện di. Tuy nhiờn trong thực tế thỡ tốc độ chất phõn tớch khụng hoàn toàn tỷ lệ tuyến tớnh với thế
Cỏc cation cơ bản
35
điện di [5]. Khi tăng thế thỡ nhiệt độ trong mao quản cũng tăng và khụng đồng đều ở cỏc điểm dẫn đến độ nhớt của dung dịch khụng đồng đều làm giảm hiệu quả tỏch. Vỡ thế, để cú kết quả tốt và ổn định, chỳng ta phải chọn thế phự hợp và giữ cho thế V này luụn khụng đổi trong suốt quỏ trỡnh điện di.
- Cỏc thế được khảo sỏt : +10kV, +15kV, +17kV, +20kV và cỏc điều kiện khỏc bao gồm:
- Hỗn hợp mẫu chuẩn gồm Asp, Cyc, Sac, Ace -k, với nồng độ 50 ppm (riờng Asp là 100 ppm)
- Dung dịch đệm điện di là: Tris/His (100mM/10mM).
- Bơm mẫu bằng phương phỏp thủy động lực học kiểu xiphụng, độ cao bơm mẫu 10cm.
- Thời gian bơm mẫu: 15s.
Cỏc kết quả khảo sỏt thu được như bảng 3.5 và hỡnh 3.6
Bảng 3.5. Kết quả khảo sỏt ảnh hưởng thế tỏch (E) đến thời gian di chuyển của cỏc chất phõn tớch
Chất phõn tớch Thời gian di chuyển (phỳt)
E=+10kV E=+15kV E=+17kV E=+20kV
Acesulfam kali 12,74 7,78 7,40 6,45 Aspartam 8,72 5,65 5,27 4,62 Cyclamat 10,38 6,57 6,19 5,39 Saccharin 11,9 7,35 6,97 6,08 900 800 700 600 500 400 300 200
Asp Sac Ace-K EOF
Thời gian di chuyển (s) 50mV 10kV 15kV 17kV 20kV Cyc
36
Hỡnh 3.6. Điện di đồ khảo sỏt ảnh hưởng của điện thế tỏch đến thời gian di chuyển và sự phõn tỏch cỏc pic
Từ kết quả thu được ở trờn ta thấy ở cỏc khi thế ỏp càng cao thỡ thời gian phõn tớch giảm đồng thời độ phõn giải cũng giảm theo. Điều này hoàn toàn phự hợp với lý thuyết vỡ khi thế ỏp tăng thỡ lực điện trường cũng tăng làm cho cỏc chất phõn tớch cũng di chuyển nhanh hơn . Ở cỏc thế cao +17 kV và + 20 kV thỡ đường nền khụng ổn định. Ở thế + 10 kV thỡ dộ phõn giải cỏc chất phõn tớch rất tốt nhưng thời gian phõn tớch lại quỏ dài (gần 13 phỳt). Cũn ở thế + 15 kV thỡ thời gian phõn tớch ngắn (gần 8 phỳt) và độ phõn giải cũng rất tốt. Do vậy chỳng tụi lựa chọn thế tỏch tối ưu là ở + 15 kV.