PHẦN III NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
5.4. Phương pháp giữ khuẩn
Khuẩn được nuơi trên mơi trường LB đặc theo phương pháp cấy vạch trên ống thạch nghiêng, nuơi ở tủ ấm 28oC trong 48 – 72 giờ. Khuẩn lạc đơn thu được trên ống thạch nghiêng mơi trường LB đặc, sau đĩ kiểm tra hoạt tính tổng hợp IAA xác định được khả năng sản sinh IAA thì tiếp tục được lưu giữ tiếp bằng 2 cách:
Cách 1: Giữ khuẩn trên ống thạch nghiêng mơi trường LB đặc trong tủ 4oC
Khuẩn lạc đơn thu được dùng đầu pipep thu lấy và tiếp tục cấy vạch trên ống thạch nghiêng, nuơi ở tủ ấm 28oC trong 48 – 72 giờ . Đến khi cĩ khuẩn lạc đơn thì gĩi lại và bảo quả trong tủ 4oC. Chú ý để ống thạch nghiêng đúng chiều để tránh sự hấp hơi nước làm hỏng ống thạch.
Cách 2: Giữ khuẩn trong mơi trường LB lỏng và glycerol 40% trong tủ -80oC
Khuẩn lạc đơn thu được đem nuơi cấy lỏng lắc 200 vịng/ phút ở 28oC khởi động trên mơi trường LB lỏng trong vịng 18-20 giờ. Dịch khuẩn thu được đem bổ sung 100 µl vào 10ml
LB lỏng tiếp tục nuơi lỏng lắc lắc 200 vịng/ phút ở 28oC trong vịng 16-18 giờ. Dịch khuẩn thu được đem bổ sung vào các ống effpendor 2 ml theo tỷ lệ 800 µl dịch khuẩn + 800 µl glycerol 80% để được glycerol 40%. Sau đĩ lắc đều ống ghi tên và gĩi kỹ cất trong tủ -80oC. Sau 24 giờ thì lấy một ống dịch khuẩn trong các ống lưu giữ ra và cấy vạch trên đĩa petri, nuơi ở tủ ấm 28oC trong 48 – 72 giờ để quan sát sự phát triển của khuẩn. Nếu khuẩn lên tốt thì quá trình lưu giữ thành cơng cịn nếu khuẩn lên kém thì cần tiến hành lưu giữ lại.