thực vật nội sinh
Đo cường độ hô hấp và hoạt tính các chất điều hòa sinh trưởng thực vật nội sinh lá của cây mầm 2 tuần tuổi sau 0, 1, 2, 3 tuần nuôi cấy trên môi trường MS½ + NAA 0,1 mg/l + BA 2 mg/l +15% nước dừa (B4) và mô sẹo trên môi trường B4 sau 1 tuần chuyển sang môi trường tạo chồi MS½ + BA 1,5 mg/l +15% nước dừa (A3), và môi trường tạo rễ MS½ + NAA 0,2 mg/l +15% nước dừa (R2).
Đo cường độ hô hấp trong tối bằng máy đo sự trao đổi khí Leaflab 2 (Hanstech) với điện cực oxygen. Cường độ hô hấp được tính bằng µlO2 /g/giờ.
Đo hoạt tính các chất điều hòa sinh trưởng thực vật auxin, cytokinin, giberelin và acid abcisic bằng sinh trắc nghiệm (Mai Trần Ngọc Tiếng và csv 1980; Bùi Trang Việt, 1992) được tiến hành như sau:
Ly trích
Nghiền 1g mẫu, ngâm 24giờ với 50 ml metanol 80% trong tối, lọc thu lấy dịch lọc. Rửa bã và lọc thêm 2 lần, mỗi lần 20 ml metanol 80%. Cô cạn dịch lọc rồi thêm vào 5 ml nước cất.
Sắc ký
Dịch ete cô cạn còn khoàng 0,5 ml chứa chất trích được chấm lên bản sắc ký silicagel F254 (20 x 20 cm) cùng với các chất chuẩn Zeatin, IAA, ABA và GA3 .
Chạy sắc ký với dung môi di chuyển chloroform : metanol : acid acetic theo tỷ lệ 80 : 15 : 5 theo thể tích.
Xác định vị trí các chất điều hòa sinh trưởng thực vật bằng đèn UV. Dựa vào vị trí của chất chuẩn, tính Rf để suy ra vị trí của mẫu. Dùng dao lam cạo lấy các hạt silic ở vị trí mẫu, hòa thành dung dịch dùng cho sinh trắc nghiệm xác định hoạt tính.
Sinh trắc nghiệm
Hoạt tính các chất điều hòa sinh trưởng thực vật được đo dựa vào sinh trắc nghiệm.
Hoạt tính auxin và acid abcisic được đo bằng sinh trắc nghiệm khúc cắt diệp tiêu lúa (Oryza sativa L.) để 24 giờ trong tối. Sự sai biệt về chỉ số tăng trưởng diệp tiêu từ mẫu trích, mẫu chuẩn tinh khiết IAA 1 mg/l và ABA 1 mg/l, đối chứng (nước cất) xác định được hoạt tính tương đương IAA và ABA.
Hoạt tính cytokinin được đo bằng sinh trắc nghiệm dựa trên sự gia tăng trọng lượng tươi của tử diệp dưa leo (Cucumis sativus L.) để 48 giờ chiếu sáng liên tục với cường độ 3.000lux, 28 ± 2oC , độ ẩm 80%. Sự sai biệt trọng lượng tươi tử diệp dưa leo ở mẫu mẫu trích, mẫu chuẩn tinh khiết BA 1 mg/l, đối chứng (nước cất) xác định được hoạt tính tương đương của Zeatin nội sinh trong mẫu.
Hoạt tính của giberelin được đo bằng sinh trắc nghiệm trụ hạ diệp cây mầm xà lách (Lactuca sativa L.) để 72 giờ chiếu sáng liên tục với cường độ 3.000lux, 28
± 2oC, độ ẩm 80%. Sự sai biệt về chiều cao trụ hạ diệp của cây mầm ở mẫu mẫu trích, mẫu chuẩn tinh khiết GA310 mg/l, đối chứng (nước cất) sẽ xác định được hoạt tính tương đương của GA3 nội sinh trong mẫu.
Quá trình đo hoạt tính các chất điều hòa sinh trưởng thực vật nội sinh trong mẫu được thực hiện theo sơ đồ tóm tắt ở hình 2.