Xác định hàm lượng apigenin và hàm lượng luteolin trong dịch chiết quả cần tây bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) [25].
2.3.2.1. Điều kiện sắc ký
- Cột sắc ký: Shim-pack GIS C18 (250 4,6 mm; 5 m). - Pha động: Acetonitril - Acid phosphoric 0,1% tỉ lệ 40:60. - Bước sóng phát hiện: 335 nm.
- Tốc độ dòng: 0,5 ml/phút. - Thể tích tiêm mẫu: 20 µl.
Dịch chiết trước khi tiến hành sắc ký được lọc qua màng lọc 0,45 µm. Hàm lượng apigenin và hàm lượng luteolin trong dịch chiết được tính từ đường chuẩn.
2.3.2.2. Thẩm định phương pháp định lượng
Quả cần tây
Dược liệu đã được rây
Dịch chiết
Xay, rây
Chiết xuất
Cao đặc
20
Phương pháp định lượng được thẩm định về độ đặc hiệu, khoảng tuyến tính và đường chuẩn, sự phù hợp của hệ thống, độ lặp lại và độ đúng dựa trên các điều kiện sắc ký đã được lựa chọn ở trên [9].
2.3.3. Phương pháp khảo sát và lựa chọn hệ dung môi eutectic
Chuẩn bị 34 hệ dung môi bằng cách phối hợp các cặp chất HBA và HBD trong điều kiện xác định. Loại bỏ các hệ không thể tạo thành dung môi đồng nhất ở điều kiện thường, những hệ còn lại được lựa chọn để tiến hành khảo sát khả năng chiết xuất apigenin và luteolin từ quả cần tây.
Tiến hành chiết xuất theo các bước mô tả ở mục 2.3.1 để thu lấy dịch chiết. Các dung môi sử dụng là các hệ đồng nhất được lựa chọn ở bước khảo sát trên, các dung môi đối chiếu là nước, methanol và ethanol 70%. Xác định hàm lượng apigenin và hàm lượng luteolin trong các mẫu dịch chiết, so sánh khả năng chiết xuất của các hệ DES, nước, methanol và ethanol 70%. Trên cơ sở đó lựa chọn dung môi chiết xuất trong các bước khảo sát tiếp theo.