Mẫu nghiên cứu
- Cân các mẫu với khối lượng đã được tính toán như sau vào 3 bình nón 100 ml riêng biệt:
Đan sâm chuẩn 0,2 g Đan sâm nguyên liệu 0,2 g Cao đặc Đan sâm 0,2 g -Chuẩn bị cả 3 mẫu với cùng một điều kiện chiết:
Thêm vào 25 ml methanol 75%, siêu âm trong 30 phút và lọc. Cho bay hơi dịch lọc trên cách thủy đến còn 1 ml, thu được dung dịch chấm sắc kí.
- Mỗi dung môi chiết thực hiện trên một mẫu, mỗi mẫu thực hiện chiết một lần. - Dung dịch chất chuẩn acid salvianolic B (Sal-B): Cân chính xác 6,19 mg acid salvianolic B (hàm lượng 99,34%) cho vào bình định mức 10 ml, thêm vừa đủ đến vạch bằng methanol 70% thu được dung dịch chuẩn gốc có nồng độ khoảng 600 g/ml.
Điều kiện sắc kí
- Pha động: Tham khảo các tài liệu [3], [17], [18], [19], [41] khảo sát các hệ dung môi sau:
Cloroform – ethyl acetat – toluen – acid formic – methanol (3:4:2:2:0,5) (I). Cloroform – ethyl acetat – acid formic (5:4:2) (II).
- Tốc độ phun: 50 nl/s. - Thể tích phun mẫu:
- Tiến hành: Triển khai theo điều kiện chung, chấm các mẫu trên băng dài 8 mm. - Phát hiện: Soi UV ở bước sóng 254 nm, 366 nm.
Kết quả
Cao DS 2 l DS 3 l DS-C 3 l Sal-B 3 l
24
Qua khảo sát lựa chọn hệ (I) cho kết quả hiện vết và tách vết tốt nhất (Bảng 3.1 và Hình 3.1)
Bảng 3.1. Kết quả SKLM định tính Sal-B trong cao đặc Đan sâm sau khi hiện vết ở bước sóng 366 nm
Vết Rf Màu sắc
Mẫu nghiên cứu
Cao DS DS DS-C Sal-B 1 0,08 Xanh lơ +++ +++ +++ +++ 2 0,18 Xanh sáng +++ +++ +++ 3 0,30 Xanh mờ ++ 4 0,33 Xanh nhạt ++ 5 0,37 Xanh +++ ++ +++ 6 0,56 Xanh +++ +++ 7 0,73 Tím +++ +++ ++ Ghi chú: (+): Có vết (++): Vết đậm (+++): Vết rất đậm Cao DS: Cao đặc Đan sâm DS-C: Đan sâm chuẩn
DS: Dược liệu Đan sâm Sal-B: Chất chuẩn acid salvianolic B
Nhận xét
Trên SKĐ quan sát sau khi hiện vết ở bước sóng 366 nm các vết tách tốt và có vết tương ứng với nhau. Trong đó:
- Dược liệu Đan sâm có 4 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn (Rf = 0,08; 0,18; 0,37; 0,73) và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Sal-B (Rf = 0,08).
- Cao đặc Đan sâm có 7 vết, trong đó: Có 5 vết tương ứng với dược liệu Đan sâm (Rf
= 0,08; 0,18; 0,37; 0,56; 0,73), có 4 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn (Rf = 0,08; 0,18; 0,37; 0,73)và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Sal-B (Rf = 0,08).