Mẫu nghiên cứu
Hình 3.1. SKĐ định tính acid salvianolic B sau khi hiện vết ở bước sóng 366 nm.
25
- Cân các mẫu với khối lượng đã được tính toán như sau vào 3 bình nón 100 ml riêng biệt:
Đan sâm chuẩn 0,75 g Đan sâm nguyên liệu 0,75 g Cao đặc Đan sâm 0,75 g -Chuẩn bị cả 3 mẫu với cùng một điều kiện chiết:
Thêm vào 5 ml ether, lắc kỹ, để yên 1 giờ, lọc. Bốc hơi dịch lọc trên cách thủy đến cắn, hòa tan cắn trong 1 ml ethyl acetat thu được dung dịch chấm sắc kí.
- Mỗi dung môi chiết thực hiện trên một mẫu, mỗi mẫu thực hiện chiết một lần. - Dung dịch chất chuẩn tanshinon IIA (Tan-IIA): Cân chính xác 3,98 mg tanshinon IIA (hàm lượng 98,09%) cho vào bình định mức 20 ml, thêm vừa đủ đến vạch bằng methanol 70% thu được dung dịch chuẩn gốc có nồng độ khoảng 200 g/ml.
Điều kiện sắc kí
- Pha động: Tham khảo các tài liệu [3], [17], [18], [19], [41] khảo sát các hệ dung môi sau:
Toluen – ethyl acetat (19:1) (I)
Ether dầu hỏa (60°C đến 90°C) – ethyl acetat (4:1) (II) N-hexan – ethyl acetat – acid formic (30:10:0,5) (III)
Ether dầu hỏa (60°C đến 80°C) – ethyl acetat – cyclohexan (5:3:2) (IV) - Tốc độ phun: 200 nl/s.
- Thể tích phun mẫu:
- Tiến hành: Triển khai theo điều kiện chung, chấm các mẫu trên băng dài 5 mm. - Phát hiện: Soi UV ở bước sóng 254 nm, hiện vết ở ánh sáng thường.
Kết quả
Qua khảo sát lựa chọn hệ (I) cho kết quả hiện vết và tách vết tốt nhất (Bảng 3.2 và Hình 3.2).
Cao ĐS 5 l DS 7,5 l DS-C 7,5 l Tan-IIA 7,5 l
26
Bảng 3.2. Kết quả SKLM định tính Tan-IIA trong cao đặc Đan sâm sau khi hiện vết ở bước sóng 254 nm
Ghi chú: (+): Có vết (++): Vết đậm (+++): Vết rất đậm Cao DS: Cao đặc Đan sâm DS-C: Đan sâm chuẩn
DS: Dược liệu Đan sâm Tan-IIA: Chất chuẩn tanshinon IIA
Nhận xét:
Trên SKĐ quan sát sau khi hiện vết ở bước sóng 254 nm các vết tách tốt và có vết tương ứng với nhau. Trong đó:
- Dược liệu Đan sâm có 3 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn (Rf = 0,15; 0,17; 0,44) và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Tan-IIA (Rf = 0,44).
- Cao đặc Đan sâm có 5 vết, trong đó: Có 3 vết tương ứng với dược liệu Đan sâm (Rf = 0,15; 0,17; 0,44), có 3 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn (Rf = 0,15; 0,17; 0,44) và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Tan-IIA (Rf = 0,44).