Định tính acid salvianolic B: - Điều kiện sắc ký:
Pha tĩnh: Bản mỏng Silica gel 60 F254, hoạt hóa ở 110 oC trong 60 phút.
Pha động: Cloroform – ethyl acetat – toluen – acid formic – methanol (3:4:2:2:0,5). Khoảng cách triển khai: 90 mm kể từ đáy bản mỏng.
Hiện vết: UV 366 nm.
- Sau khi hiện vết ở bước sóng 366 nm, trên sắc kí đồ định tínhacid salvianolic B, cao đặc Đan sâm có 5 vết tương ứng với dược liệu Đan sâm, có 4 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Sal-B (Rf = 0,08).
Định tính tanshinon IIA: - Điều kiện sắc ký:
Pha tĩnh: Bản mỏng Silica gel 60 F254, hoạt hóa ở 110 oC trong 60 phút. Pha động: Toluen – ethyl acetat (19:1).
Khoảng cách triển khai: 90 mm kể từ đáy bản mỏng. Hiện vết: UV 254 nm.
- Sau khi hiện vết ở bước sóng 254 nm, trên sắc kí đồđịnh tính tanshinon IIA, cao đặc Đan sâm có 3 vết tương ứng với dược liệu Đan sâm, có 3 vết tương ứng với Đan sâm chuẩn và có 1 vết tương ứng với chất chuẩn Tan-IIA (Rf = 0,44).
5.1.2. Định tính, định lượng đồng thời Sal-B, Tan-IIA trong cao đặc Đan sâm bằng HPLC bằng HPLC
Xây dựng phương pháp định tính, định lượng đồng thời Sal-B, Tan-IIA trong cao đặc Đan sâm bằng HPLC với điều kiện sắc kí:
Cột C18 (150 x 4,6 mm, 5 m)
Detector: UV 270 nm
Tốc độ dòng: 1,0 ml/phút
Nhiệt độ cột: 20 oC
43
Pha động: acetonitril (dung môi A) - acid phosphoric 0,1% (dung môi B) theo chương trình rửa giải gradient: 0-20 ph: 26% A; 20-21 ph: 26-86% A; 21-35 ph: 86% A; 35-36 ph: 86-26% A; 36-40 ph: 26% A.
Phương pháp phân tích có độ nhạy cao, có tính đặc hiệu, tính tương thích hệ thống tốt (RSD của thời gian lưu và diện tích peak của Sal-B và Tan-IIA đều < 2,0%), khoảng tuyến tính từ 29,96 đến 958,63 µg/ml đối với Sal-B và từ 1,02-32,53 µg/ml đối với Tan- IIA, độ lặp lại và độ chính xác trung gian tốt, độ đúng cao (tỷ lệ thu hồi Sal-B trong khoảng 97-103%; tỷ lệ thu hồi Tan-IIA trong khoảng 95-105%). Hàm lượng Sal-B và Tan-IIA trong các mẫu cao đặc Đan sâm khảo sát lần lượt là 7,16% - 7,72% và 0,011% - 0,785%.