Chuột được chia ngẫu nhiên thành 4 lô:
- Lô chứng sinh lý: Chuột bình thường không gây mô hình mất tế bào thần kinh và được uống nước trong suốt quá trình nghiên cứu.
- Nhóm chuột được tiêm TMT (2,8 mg/kg, i.p) để gây mô hình chuột mất tế bào thần kinh. Dung dịch TMT được hòa tan trong đệm phosphat (PBS), pH=7,4.
+ Lô chứng bệnh lý: Chuột được uống nước cất trong suốt quá trình nghiên cứu và tiêm TMT liều duy nhất.
+ Lô TE 10 (uống TE liều 10 mg/kg TT): chuột uống 1 tuần TE mức liều 10 mg/kg TT trước khi tiêm TMT liều duy nhất và trong suốt quá trình thí nghiệm.
18
+ Lô TE 40 (uống TE liều 40 mg/kg TT): chuột uống 1 tuần TE mức liều 40mg/kg TT trước khi tiêm TMT liều duy nhất và trong suốt quá trình thí nghiệm.
Cách pha mẫu: cao phân đoạn TE được pha trong nước cất để tạo dung dịch thuốc uống:
+ Mẫu cho lô TE 40: 40 mg TE pha trong 10 ml nước cất tạo dung dịch thuốc có nồng độ 4 mg/ml.
+ Mẫu cho lô TE 10: tiến hành pha tương tự như mẫu TE 40, sau đó pha loãng 4 lần được dung dịch thuốc 1 mg/ml.
Chuột được uống TE hằng ngày với công thức: V (ml) = 0,01 x cân nặng (g) Ví dụ chuột lô TE 40 cân nặng 30g sẽ được uống V= 0,01 x 30 = 0,3 ml mẫu thuốc lô TE 40
Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành trên 2 thử nghiệm đó là thử nghiệm nhận diện đồ vật chuyển vị trí và thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến để đánh giá tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ của TE. Để tìm hiểu về cơ chế hóa sinh mà cao phân đoạn TE tác động lên hệ thần kinh, chúng tôi tiến hành cắt tiêu bản rồi nhuộm Nissl. Các thử nghiệm được tiến hành theo thời gian như sau:
Hình 2.1:Sơ đồ tiến hành thực nghiệm theo thời gian
Trong sơ đồ thử nghiệm Hình 2.1: Nhóm chuột tiêm TMT (2,8 mg/kg, i.p) một liều duy nhất 9 giờ 30 phút sáng ngày thứ 8, chuột tiêm TMT được uống TE liều 10 mg/kg CN hoặc 40 mg/kg CN hoặc uống nước từ bắt đầu từ ngày 1 và trong suốt quá trình nghiên cứu. Lô chuột sinh lý uống nước trong suốt nghiên cứu và không tiêm TMT. Thử nghiệm OLT được thực hiện ở ngày thứ 22 sau điều trị với TE 21 ngày và thử nghiệm mê lộ chữ Y cải tiến được thực hiện ngày thứ 29 sau khi điều trị TE 28 ngày. Ngày thứ 30, chúng tôi tiến hành lấy não chuột để chuẩn bị cho việc cắt tiêu bản và nhuộm Nissl.
19