vệ tế bào thần kinh.
Phương pháp nhuộm Nissl được tiến hành theo mô tả của Kadar cùng cộng sự [65].
- Sau khi tiến hành các thử nghiệm hành vi, chuột được gây mê bằng thuốc gây mê pentobarbital tiêm phúc mạc. Não chuột được rửa giải với dung dịch formadehyd 4 % sau đó được tách ra. Não chuột được ngâm trong dung dịch sucrose nồng độ khác nhau (12 %, 15 % và 30 %) trong 48 giờ sau đó được bảo quản ở tủ -80 ͦ C.
- Não chuột được cắt thành lát (10 µm) ở vị trí Bregma -1,94 đến -2,16 mm bằng máy cắt lạnh Leica CM 1950 (Bệnh viện Quân Y 108) được cài đặt ở -23 ͦ C. Bảo quản lát cắt ở -20◦C cho đến khi tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.
- Mỗi lô thí nghiệm gồm 10 chuột, mỗi chuột thí nghiệm được cắt 3 lát, mỗi lát cắt cách nhau 100µm. Vị trí các lát cắt ngẫu nhiên trong hồi hải mã.
21
+ Chuẩn bị dung dịch tím tinh thể (cresyl violet) nồng độ 0,5 % hòa tan trong nước.
+ Lát cắt mô não được làm khô ở nhiệt độ phòng 30 phút. Tiếp theo tiến hành ngâm lát cắt mô não trong ethanol với các nồng độ giảm dần: ethanol 95 %/ 15 phút, sau đó 70 %/ 1 phút, 50 %/ 1 phút.
+ Tiếp tục rửa trong nước cất trong 2 phút.
+ Nhuộm lát cắt não bằng dung dịch tím tinh thể/ 10 phút ở nhiệt độ 60 ◦C. Tiếp tục rửa lát cắt não bằng nước cất trong 1 phút.
+ Chuyển lát cắt não vào ethanol 95 %/ 2 phút, ethanol 100 %/ 5 phút rồi tiếp tục vào ethanol 100 %/ 2 phút.
+ Mounting, phủ lát cắt não bằng lamen.
+ Quan sát và chụp ảnh hồi hải mã dưới kính hiển vi (Máy ảnh Olympus IX73). Mỗi lát được quan sát và chụp lại hồi hải mã ở vật kính 4x và tại vùng CA1 và CA3 ở vật kính 20x.