- Bộ câu hỏi tự điền gửi đến tất cả các khoa XN của 64 TTYTDP tuyến tỉnh nhân lực, TTB, hiện trạng sử dụng TNGB, một số tiêu chuẩn về ATSH của các PXN VSV.
- Phỏng vấn theo bộ câu hỏi về kiến thức của các CBXN về một số tiêu chuẩn ATSH hƣớng dẫn của WHO.
- Quan sát theo bảng kiểm về thực hành ATSH và các thao tác thực hành của các CBXN tại các TTYTDP theo hƣớng dẫn WHO.
- Lấy mẫu XN để xác định mức độ nhiễm VSV của các PXN. Có 3 loại mẫu: mẫu không khí, mẫu bề mặt và mẫu nƣớc. Mẫu không khí đƣợc lấy để kiểm tra cho tủ
26
ATSH và không khí trong PXN. Mẫu bề mặt để kiểm tra mặt bàn XN và bàn tay của CBXN.
Quy trình lấy mẫu, vận chuyển và thực hiện các XN kiểm chứng nhƣ sau [20], [23], [59], [64], [65]:
Thu thập mẫu không khí:
Bao gồm không khí trong tủ ATSH và PXN đƣợc tiến hành bằng cách đặt các đĩa thạch tại các vị trí (góc phòng, giữa phòng nơi làm việc) và chiều cao khác nhau trong phòng (ngang mặt bàn làm việc, mặt đất).
Mỗi vị trí đặt 3 loại môi trƣờng bao gồm: thạch máu (cho các vi khuẩn Gram dƣơng), thạch desoxycholate citrate – DC (cho các vi khuẩn Gram âm) và thạch sabouraud (cho các loại nấm). Các đĩa thạch đƣợc đặt ngửa, mở nắp trong 30 phút. Sau khi đã đủ thời gian, đậy nắp đĩa thạch và vận chuyển ngay về PXN. Tiến hành đồng thời đặt các đĩa môi trƣờng không mở nắp (không cho tiếp xúc với không khí) để làm chứng âm.
Thu thập mẫu bề mặt:
Bao gồm: mặt bàn XN, tay CBXN đƣợc tiến hành bằng phƣơng pháp quệt tăm bông. Tăm bông vô trùng đƣợc nhúng ƣớt bằng nƣớc muối sinh lý 9%o, sau đó đƣợc quệt lên bề mặt điểm cần kiểm tra nhƣ: Mặt bàn làm việc, bàn tay, cổ tay, ngón tay đeo nhẫn của CB.
Thu thập mẫu nước thải PXN
Mẫu nƣớc thải PXN cần đƣợc thu thập trƣớc khi đổ vào hệ thống nƣớc thải công cộng nhằm đánh giá sự tồn tại của các vi khuẩn, đặc biệt là các vi khuẩn gây bệnh. Mẫu nƣớc thải đƣợc lấy vào chai vô trùng và vận chuyển ngay về PXN.
Phương pháp xác định các chỉ tiêu VSV:
Với các nhóm chỉ tiêu nhằm đánh giá mức độ sạch của PXN, chúng tôi sử dụng các chỉ tiêu đánh giá sau: Cầu khuẩn Gram (+), Trực khuẩn Gram (-), Trực khuẩn mủ xanh và nấm.
1/ Cầu khuẩn Gram (+).
- Bệnh phẩm thu thập sau khi tăng sinh ở môi trƣờng canh thang đƣợc cấy trên môi trƣờng thạch máu, ủ nhiệt độ 37OC / 24 giờ.
27
hợp thành hình chuỗi (liên cầu) hoặc chùm nho (tụ cầu).
- Làm các phản ứng sinh vật hóa học và xác định vi khuẩn.
2/ Trực khuẩn Gram (-): các loại vi khuẩn đƣờng ruột nhƣ: Salmonella, Shigella, Escherichia coli, coliform, Pseudomonas (trực khuẩn mủ xanh).
- Bệnh phẩm thu thập đƣợc cấy trực tiếp vào môi trƣờng nuôi cấy chọn lọc cho từng loại vi khuẩn:
Môi trƣờng SS chọn lọc cho Salmonella và Shigella (đối với Salmonella, bệnh phẩm cần đƣợc cấy tăng sinh bằng môi trƣờng Selenit trong vòng 18 đến 24 giờ trƣớc khi cấy chuyển vào môi trƣờng SS).
Môi trƣờng Endo chọn lọc cho Escherichia coli và coliform. Môi trƣờng Deoxycholat citrat (DC) hoặc MacConkey.
- Làm các phản ứng sinh vật hóa học và xác định vi khuẩn.
- Đánh giá mức độ nhiễm khuẩn trên các đối tƣợng kiểm tra. 3/ Nấm: chủ yếu phát hiện nấm Candida abicans.
- Soi trực tiếp mẫu bệnh phẩm hoặc nhuộm màu rồi soi trên kính hiển vi, quan sát hình thể sợi nấm hoặc bào tử nấm.
- Cấy bệnh phẩm vào canh thang Sabouraud 2% và thạch đĩa Sabouraud.
4/ Xác định các chỉ tiêu VSV trong nƣớc thải: Bao gồm vi khuẩn gây bệnh, vi khuẩn hoại sinh:
- Tổng số vi khuẩn hiếu khí (định lƣợng): Pha loãng mẫu theo tỷ lệ 1/100 và 1/1000. Lấy 1ml mẫu sau khi pha loãng láng trên bề mặt đĩa thạch dinh dƣỡng. Để tủ ấm 37OC. Đọc kết quả sau 24 giờ. Tổng số vi khuẩn hiếu khí trong 1 ml nƣớc thải bằng số trung bình cộng của các đĩa thạch sau khi nuôi cấy (sau khi tính toán và quy đổi ra tƣơng đƣơng với 1 ml mẫu cấy và nhân với hệ số pha loãng).
- Tìm các vi khuẩn gây bệnh thƣờng gặp nhƣ: Tả, lỵ, thƣơng hàn, E. coli (định tính): dùng màng lọc có máy hút chân không lọc 1 lít nƣớc thải PXN. Lấy màng lọc ra và cho vào môi trƣờng tăng sinh thích hợp cho các loại vi khuẩn đƣờng ruột. Xác định vi khuẩn gây bệnh tƣơng tự nhƣ xác định các vi khuẩn Gram (-).
28