Hoạt hóa S.boulardii ở 300C trong 24 giờ trong 10 ml môi trường Hansen, tiếp đến chuyển toàn bộ sang bình có chứa 100 ml môi trường Hansen nuôi cấy cùng điều kiện. Quá trình nhân giống thực hiện trong điều kiện hiếu khí, sử dụng thiết bị khuấy từ với tốc độ 300 vòng/phút. Sau 12 giờ kết thúc quá trình nuôi cấy và thu sinh khối, 100 ml huyền phù được ly tâm một lần với tốc độ 4000 rpm trong 10 phút, sau đó được rửa với 100 ml nước muối sinh lý (0.9% NaCl, 40C) trộn đều cặn và ly tâm lần 2 theo điều kiện như trên. Tế bào S. boulardii được rửa 2 lần, lần đầu với nước muối sinh lý, lần sau với nước cất vô trùng, sau đó thu sinh khối và chuẩn bị cho quá trình vi bao. Chất bao là dung dịch alginate 2% (w/v) có bổ sung 1.00% (w/v) maltodextrin (HiMedia, India). Dung dịch alginate được ngâm 24 giờ để alginate được hòa tan hoàn toàn, sau đó tiệt trùng ở 1210C trong 15 phút trước khi dùng. Maltodextrin được hòa tan với nước cất rồi bổ sung vào dung dịch alginate ở điều kiện thường. Cho sinh khối thu được sau ly tâm được vào 200 ml dung dịch alginate 2% (w/v) có
22
bổ sung maltodextrin 1.00% (w/v), khuấy điều hỗn hợp bằng máy khuấy từ với tốc độ 300 vòng/ phút, thực hiện ở 40C trong 15 phút để các thành phần được hòa tan vào nhau hoàn toàn. Quá trình bao gói được thực hiện bằng cách dùng bơm kim tiêm nhỏ giọt hỗn hợp trên vào dung dịch CaCl2 0.75% đặt trên mấy khuấy từ để các hạt không dính vào nhau. Tỷ lệ hỗn hợp alginate và S.boulardii với dung dịch CaCl2 là 1 : 5. Các thao tác với S.boulardii
thực hiện ở điều kiện 40C. Sau khi kết thúc quá trình nhỏ giọt, dung dịch CaCl2 chứa hạt bao gói được giữ ở 40C trong 30 phút để hạt bao ổn định cấu trúc. Sau đó tiến hành lọc hạt qua rây, rửa với 200 ml nước muối sinh lý và 200 ml nước cất, làm ráo lúc này thu được mẫu hạt tươi (T). Tiếp theo, cho mẫu T vào tủ sấy đối lưu trong 5 giờ ở 400C, thu được mẫu hạt sấy (S). Một phần mẫu T được đem đi nghiền mịn, lúc này thu được mẫu hạt sấy nghiền (SN) để tiến hành khảo sát. Thí nghiệm được tiến hành trong điều kiện vô trùng [71].