21
2.3.4.1. Chuẩn bị
Chuột cống trắng, giống đực khỏe mạnh có khối lượng từ 250 - 300 g, được chuyển tới phòng nuôi nhốt và cho ăn uống đầy đủ trong 1 tuần. Sau đó, lưng chuột được cạo sạch lông bằng tông đơ 24 giờ trước thí nghiệm.
2.3.3.2. Thiết kế thí nghiệm:
Chuột được chia ngẫu nhiên thành 5 nhóm:
- Nhóm 1 (chứng): Chuột bình thường không bôi chế phẩm - Nhóm 2: Chuột được bôi gel capsaicin
- Nhóm 3: Chuột được bôi gel capsaicin có chứa N-methyl pyrrolidon - Nhóm 4: Chuột được bôi gel capsaicin có chứa Transcutol
Lượng chính xác 0,5 g mỗi mẫu được bôi đều lên diện tích 2,5 x 2,5 cm2 trên phần lưng đã cạo lông, sau đó dùng gạc và băng dính y tế che lên vị trí bôi để giảm thiểu quá trình bay hơi. Chuột được cho ăn uống bình thường trong quá trình làm thí nghiệm. Sau 24 giờ, tách riêng phần da đã bôi thuốc và cố định mẫu trong lượng dung dịch formalin 10% lớn hơn lượng mẫu ít nhất 10 lần và trong ít nhất 24 giờ. Tiến hành vùi bệnh phẩm trong parafin trong 16 giờ sau đó cắt mảnh cắt vi thể bằng máy THERMO HM 325. Tiếp tục tiến hành nhuộm hematoxylin - eosin rồi soi trên kính hiển vi quang học.
Quá trình xử lý mẫu và cắt nhuộm được tiến hành tại phòng xét nghiệm của bệnh viện Đại học Y Hà Nội. Mẫu mô được đo ở vật kính 40 trên kính hiển vi Olympus 8G52445.
Cách tiến hành đo bề dày lớp sừng:
+ Đặt mẫu đã được xử lý lên lam kính và hiêu chỉnh thiết bị để tiến hành quan sát.
+ Mẫu da được quan sát và chụp lại.
+ Quan sát và đo độ dày của lớp ngoài cùng màu đậm theo tỉ lệ của vật kính quan sát.