Dung môi chiết là một yếu tố vô cùng quan trọng quyết định hiệu suất của
cực: eter, ethylacetat, chloroform, methanol và acetonitril. Cố đi ̣nh các bƣớc chiết khác nhƣ quy trình trên s ử dụng nền mẫu thực phẩm chức năng có nguồn gốc thảo dƣợc không phát hiện các alkaloid. Sau khi cân mẫu, thêm 25 µL dung dịch chuẩn hỗn hợp 1-10 µg/mL các alkaloid ( để thu đƣợc nồng độ alkaloid trong dịch cuối là 5 ng/mL đối với nicotin, scopolamin, atropin và 50 ng/mL đối với brucin, strychnin, koumin, aconitin, colchicin trong dịch chiết cuối cùng trƣớc khi bơm vào máy LC/MS/MS). Để yên 5 phút. Tiến hành chiết lặp hai lần theo qui trình trên thu đƣơ ̣c kết quả trung bình nhƣ bảng sau:
Bảng 3.7 : Ảnh hƣởng của dung môi chiết đến hiệu suất chiết các alkaloid
Hiệu suất (%) Anconitin Atropin Brucin Colchicin Koumin Nicotin Scopolamin Strychnin eter+1mL đệm pH9 97,8 4,08 1,52 22,1 47,9 50,4 42,6 19,3 ethylacetat+ 1mL đệm H9 79,9 25,0 49,3 76,2 72,9 106 71,8 63,2 CHCl3+1mL đệm pH9 19,4 64,5 49,3 30,4 41,9 109 55,9 31,4 ACN+1mL đệm pH9 8,1 59,6 47,4 28,5 30,5 84,5 50,4 25,8 MeOH+1mL đệm pH9 7,8 34,6 29,7 21,7 27,7 63,8 46,0 20,1
Hình 3.16 : Biểu đồ ảnh hƣởng của dung môi chiết đến hiệu suất chiết các alkaloid
Nhận xét: Sử dụng dung môi chiết là ethylacetat cho hiệu suất chiết cao đối với đa số các alkaloid trừ atropin trong khi sử dụng dung môi chiết là chloroform thì cho hiệu suất chiết của atropin cao nhất. Do vậy chúng tôi sử dụng cả hai loại dung môi chiết này để có thể thu đƣợc hiệu suất chiết cao nhất đối với tất cả các alkaloid nghiên cứu. Nhƣ vậy mẫu sau khi đƣợc kiềm hóa đƣợc chiết bằng 10 mL ethylacetat, thu phần dung môi hữu cơ phía trên, phần dịch phía dƣới đƣợc chiết lặp nhƣ trên với 10 mL chloroform. Gộp dịch chiết hai lần đem cô quay chân không và phân tích.