d) Đề nghị và điểm:
2.5 Lựa chọn chỉ tiêu để xây dựng bộ tiêu chuẩn và khảo sát, đánh giá trên
trên nguyên liệu nấm Linh chi khô
Đánh giá một dược liệu là xác định dược liệu đó có đúng tiêu chuẩn quy định hay không. Khi đánh giá thì dựa vào tiêu chuẩn nhà nước được ghi trong Dược điển hoặc tiêu chuẩn ngành.
Một bộ tiêu chuẩn thường gồm nhiều chỉ tiêu khảo sát, tùy thuộc vào yêu cầu chất lượng, điều kiện kỹ thuật ở mỗi quốc gia và tính cần thiết của vấn đề. [11]
Hiện nay chỉ có Dược điển Trung Quốc 2005 đã nghiên cứu về nấm Linh chi. Đối với dược liệu, Dược điển thường quy định các chỉ tiêu như sau:
Bảng 2.6 Các chỉ tiêu về một số dược liệu Chỉ tiêu chất lượng Nấm Linh chi (Theo DĐTQ 2005)
Nhân sâm (Theo
DĐVN IV) DĐÂĐ 2010) Gừng (Theo
Mô tả Vi phẫu Bột Định tính Tạp chất Độ ẩm Tro toàn phần
Tro không tan trong acid
Kim loại nặng
Ô nhiễm vi sinh vật
Chất chiết được trong dược liệu
Định lượng Chế biến Bảo quản Tính vị, quy kinh Công năng, chủ trị Cách dùng, liều lượng Kiêng kỵ
Dựa trên những cơ sở trên, trong khuôn khổ đề tài luận văn tốt nghiệp đại học và điều kiện kỹ thuật, xin lựa chọn các chỉ tiêu để xây dựng tiêu chuẩn cho nguyên liệu nấm Linh khô khô như sau:
Phần mô tả thực vật, bột dược liệu, định tính bằng sắc ký lớp mỏng, độ ẩm, tro toàn phần, tro không tan trong acid, chất chiết được trong dược liệu, định lượng polysaccharides bằng phương pháp UV-VIS, công năng, chủ trị, cách dùng, liều lượng vẫn giữ nguyên theo tiêu chuẩn của Dược điển Trung Quốc 2005.
Bổ sung thêm: bán định lượng nồng độ kim loại nặng (theo chì), các phương pháp định tính các nhóm hoạt chất chính, định lượng
Polysaccharides thô bằng phương pháp chiết ở nhiệt độ thấp, chế biến, bảo quản, tính vị, quy kinh, kiêng kỵ.
Tiến hành khảo sát và đánh giá 10 mẫu nấm Linh chi khô theo: độ ẩm, tro toàn phần, tro không tan trong acid so với Dược điển Trung Quốc 2005 và các phương pháp bổ sung sau:
Định tính Triterpenoid [19]
Thử nghiệm Liebermann – Burchard thường được dùng để phát hiện triterpenoid và steroid không bão hòa (như cholesterol) dựa trên sự hình thành của một loạt các màu sắc (bắt đầu từ màu tím, màu hồng, đỏ sau đó chuyển sang màu xanh lá). Màu sắc là do các nhóm hydroxyl (-OH) của các triterpenoid phản ứng với các chất phản ứng và làm tăng liên hợp của các gốc không bão hòa trong vòng hợp nhất liền kề.
Cách tiến hành:
Hòa tan chế phẩm thử trong chloroform, sau đó thêm vài giọt anhydride acetic và sulfuric acid đậm đặc. Quan sát hiện tượng, nếu có xảy ra phản ứng màu, kết luận là có sự hiện diện của triterpenoid.
Định tính Saponin [11]
Một đặc tính quan trọng của saponin là tính tạo bọt. Nên bằng phương pháp: Lắc mạnh nhiều lần ống nghiệm chứa dung dịch thử, nếu có nhiều bọt được tạo ra và có độ bền lâu, có thể kết luận về sự hiện diện của saponin.
Do saponin là một phân tử lớn và có cùng một lúc một đầu ưa nước và một đầu kị nước, nên có tính chất chung là khi hòa tan vào nước có tác dụng làm giảm sức căng bề mặt của nước, tạo nhiều bọt. Ngoài ra, dựa trên hiện tượng tạo bọt ở môi trường kiềm và acid có thể sơ bộ phân biệt được saponin steroid và saponin triterpenoid.
Định tính Alkaloid [12, 16]
Một trong những phương pháp chính xác để xác định sự hiện diện của alkaloid trong dược liệu là cho tạo tủa với thuốc thử.
Hầu hết các alkaloid đều có tính base yếu. Khi tác dụng với acid, alkaloid tự do biến đổi thành các muối tương ứng. Các muối này cho phản ứng đặc trưng của alkaloid với các thuốc thử Mayer (dung dịch potassium mercuric iodide K2HgI4) cho tủa trắng hay vàng nhạt, Dragendorff (dung dịch potassium bismuth iodide KBiI4) cho tủa vàng cam đến đỏ nâu hay với thuốc thử Bouchardat cho tủa nâu, … Các tủa này rất ít tan trong nước, sinh ra hầu hết là do sự kết hợp của một cation lớn là alkaloid với một anion lớn thường là anion phức hợp của thuốc thử.
Định tính Acid hữu cơ [11]
Acid hữu cơ là những chất có nhóm chức carboxyl (R – COOH). Muốn xác định sự có mặt của các acid hữu cơ tự do trong dược liệu ta có thể sử dụng hydrocarbonat kiềm cho vào dịch chiết. Quan sát hiện tượng, nếu có bọt khí (CO2) sủi lên, kết luận có acid hữu cơ.
HCO3- + H+ CO2 + H2O Định lượng Polysaccharides thô (GLPs) [1, 4, 20]
Chiết GLP ở nhiệt độ thấp nhằm ổn định cấu trúc sinh học của các GLPs theo qui trình chiết suất của Yihuai Gao và cộng sự, 2001.
Bán định lượng kim loại nặng (theo chì) [21]
Dithizone, một hợp chất hữu cơ chứa lưu huỳnh, có khả năng tạo phức màu với Pb tạo ra chì-dithizonat (màu đỏ).
Để bán định lượng hàm lượng Pb trong dược liệu, ta tiến hành: Chuẩn bị mẫu chuẩn (chứa lượng Pb đã biết trước) và mẫu thử trong cùng điều kiện, cho tạo phức màu với dithizone, so sánh màu của 2 mẫu, rút ra kết luận. Khi khảo sát bán định lượng chì trong dược liệu, dung dịch thử phải có màu nhạt hơn dung dịch chuẩn có chứa 10 ppm chì thì mới đạt chuẩn. Ngoài ra, có thể định lượng chính xác hàm lượng Pb trong mẫu bằng cách chiết phức chì – dithizonat vào chloroform rồi tiến hành đo mật độ quang.
Chương 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP