* Mục đích:
Tiếp tục tinh chế kháng sinh P2 nhằm thu được thành phần kháng sinh tinh khiết hơn.
41
Kháng sinh P2 được chạy cột Silicagel bằng hệ dung môi ethylacetat: ethanol : n-hexan với tỷ lệ 20:1:1 đến khi dung môi chảy ra chỉ còn màu vàng nhạt thì thu 30 phân đoạn mỗi phân đoạn 3ml.
Tiến hành thử hoạt tính kháng sinh từng phân đoạn bằng phương pháp khoanh giấy lọc với VSV kiểm định là vi khuẩn P. mirabilis. Kết quả của thí nghiệm này được thể hiện trên bảng 3.17.
Bảng 3.17. Kết quả thử HTKS các phân đoạn sau tinh chế lần 3 Phân đoạn D(mm) s Phân đoạn D(mm) s
1 0,00 0,00 16 20,33 0,58 2 0,00 0,00 17 20,01 1,31 3 0,00 0,00 18 19,93 0,51 4 9,24 0,30 19 18,86 0,55 5 11,25 0,67 20 17,88 0,65 6 11,07 0,67 21 15,84 0,55 7 16,03 0,80 22 15,52 0,53 8 17,33 0,52 23 13,15 0,09 9 18,83 0,56 24 10,02 0,19 10 19,31 0,56 25 7,67 0,57 11 20,85 0,44 26 6,31 1,53 12 21,00 0,83 27 0,00 0,00 13 21,88 0,58 28 0,00 0,00 14 21,99 1,33 29 0,00 0,00 15 22,87 0,58 30 0,00 0,00 Các phân đoạn có hoạt tính kháng sinh được mang chạy sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi 2.1. Kết quả này được thể hiện trong bảng 3.18.
42
Bảng 3.18. Kết quả SKLM các phân đoạn sau tinh chế lần thứ ba
Phân đoạn Số vết Rf vết 1 Rf vết 2
4-10 1 vết 0,58 -
11-15 2 vết 0,58 0,40
16-26 1 vết - 0,40
* Nhận xét
Bảng 3.17 cho thấy 3 phân đoạn đầu tiên và 4 phân đoạn cuối cùng không có HTKS. Các phân đoạn còn lại có HTKS khá cao, đặc biệt là các phân đoạn từ 4 đến 18.
Bảng 3.18. cho thấy các phân đoạn từ 4 đến 10 là cùng 1 kháng sinh có Rf=0,58. Các phân đoạn từ 16 đến 26 cho cùng 1 chất kháng sinh có Rf=0,40. Trong các phân đoạn từ 11 đến 15 chứa 2 kháng sinh.
Tiến hành như lần tinh chế kháng sinh thứ 2, gộp các phân đoạn từ 4 đến 10, cất quay chân không ở nhiệt độ 500C đến hết dung môi, kết tinh thu được 0,0321g kháng sinh có Rf=0,58 (ký hiệu N1). Gộp các phân đoạn từ 16 đến 26, cất quay chân không ở nhiệt độ 500C đến hết dung môi, kết tinh thu được 0,0424 g kháng sinh có Rf=0,4 ( kí hiệu N2):
Hiệu suất tinh chế kháng sinh N1 từ hỗn hợp kháng sinh P2 là:
HN1=
x 100% = 15,52 %
Hiệu suất tinh chế kháng sinh N2 từ hỗn hợp kháng sinh P2 là:
HN2=
x 100% = 20,52 %
Thử SKLM kháng sinh N1, N2 này với các kháng sinh X1, X2 thu được ở trên với các hệ dung môi khác nhau thấy cho Rf tương tự nhau, các vết sắc ký đều tròn, gọn, do đó kháng sinh N1 thu được chính là kháng sinh X1 của lần tinh chế thứ 2. Và kháng sinh N2 chính là kháng sinh X2 của lần tinh chế 2. Gộp
43
kháng sinh N1 với kháng sinh X1 bên trên thu được kháng sinh tinh khiết 1 ( kí hiệu là KS1).
Tương tự như vậy, gộp kháng sinh N2 với kháng sinh X2 thu được kháng sinh tinh khiết 2 ( kí hiệu KS2).
Khối lượng của kháng sinh KS1 sau ba lần tinh chế là: mKS1= 0,0423 + 0,0321 = 0,0744 g
Hiệu suất tinh chế kháng sinh KS1 từ kháng sinh thô là:
HKS1= x 100% = 8,15 %
Khối lượng của kháng sinh KS2 sau ba lần tinh chế là: mKS2= 0,0532 + 0,0424 = 0,0956 g (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hiệu suất tinh chế kháng sinh 2 từ kháng sinh thô là:
HKS2= x 100% = 10,47 %