1.5.2.1. Nguyên lý
Sắc kí (Chromatography) là phương pháp tách, phân ly, phân tách các chất dựa vào sự phân bố khác nhau của chúng giữa hai pha động và tĩnh. Khi tiếp xúc với pha tĩnh, các cấu tử của hỗn hợp sẽ phân bố giữa pha động và pha tĩnh tương ứng với tính chất của chúng (tính bị hấp phụ, tính tan, …). Trong hệ thống sắc kí chỉ có các phân tử pha động mới chuyển động dọc theo hệ sắc kí. Các chất khác nhau sẽ có ái lực khác nhau với pha động và pha tĩnh. Trong quá trình chuyển động dọc theo hệ sắc kí hết lớp pha tĩnh này đến lớp pha tĩnh khác, sẽ lặp đi lặp lại quá trình hấp phụ, phản hấp phụ. Hệ quả là các chất có ái lực lớn với pha tĩnh sẽ chuyện động chậm hơn qua hệ thống sắc kí so với các chất tương tác yếu hơn pha này. Nhờ đặc điểm này mà người ta có thể tách và làm sạch các chất qua quá trình sắc kí.
Trong các phương pháp phân tách hiện nay, sắc kí là phương pháp hữu hiệu nhất để tách các chất ra khỏi một hỗn hợp, ngay cả những hỗn hợp phức tạp về thành phần và khác nhau về hàm lượng trọng hỗn hợp như dịch chiết từ các hợp chất từ cây cỏ. Từ khi phương pháp sắc kí ra đời (1903) cho tới nay rất nhiều kỹ thuật sắc kí cũng như các cải tiến về pha tĩnh, thiết bị và phương pháp phát hiện đã được phát triển và áp
dụng trong thực tế để phân tích định tính, định lượng và chiết tách các chất, đặc biệt là thành phần hóa học của cây cỏ.
Nguyên lí tách của sắc kí cột cũng như của các loại sắc kí khác: một mẫu thử được nạp lên một cột chứa chất hấp phụ (thường là silica gel, nhôm oxid).Cột chứa chất hấp phụ này đóng vai trò là một pha tĩnh. Một dung môi khai triển (pha động) di chuyển dọc theo cột sẽ làm di chuyển các cấu tử của mẫu thử, do các cấu tử này có độ phân cực khác nhau nên ái lực của chúng với pha tĩnh cũng khác nhau, vì vậy chúng bị dung môi giải hấp và bị đẩy đi với vận tốc khác nhau tạo các dải riêng biệt có vị trí khác nhau ra khỏi cột tại các thời điểm khác nhau, làm cơ sở cho việc phân tích định tính và định lượng.
1.5.2.2. Phương pháp tiến hành
Sử dụng phương pháp chiết lỏng-lỏng thu được phlorotannin kỹ thuật, tiếp tục làm sạch chúng bằng phương pháp sắc kí cột sử dụng 01 chất hấp thụ là silicagel.
* Tinh chế phlorotannin bằng sắc kí cột sử dụng chất hấp phụ là silicagel: Lựa chọn dung môi rửa giải thích hợp.
* Tinh chế phlorotannin bằng sắc kí cột sử dụng chất hấp phụ là silicagel lần 2: Lựa chọn dung môi rửa giải thích hợp và kiểm tra sự có mặt của phlorotannin bằng sắc kí bản mỏng.