u Protein tẻngsổ(mg)
12.3.3 Kết tủa protein ieptỉn và đông khô tạo chế phẩm leptin
• Gỉai đoạn kết tủa protein- leptin:
Thăm dò nồng độ muối amonisulphat đế kết tủa protein - leptin:
Chúng tôi thực hiện kết tủa ỉeptin bắng dung địch muối amonisuỉphat ở các nồng độ 20%, 30%, 40% và 50%, ly tâm 10000 vòng/ phút trong 30 phút ở 0(lc, thu kết tủa. Hòa tan tủa và xác định hàm lượng protein, Ket quả thu đirợc tóm tất trong bảng 2.4
^protein (nig)
20°o 30% 40° ừ 50%
Nôn Sĩ độ ainoíìisiilphat (#o)
Báng 2,4: Tổng sổ protein theo nồng độ amonisulphat sử dụng
p-|n A A
Hình 2.4: Tống sổ protein theo nồng độ amonisuíphat sử dụng
Từ kết quả trên chúng tôi thấy khi kết tủa leptin bang amonisulphat nồng độ 40% lượng protein thu được lả lớn nhất. Điều đó chửng tỏ ở nồng độ 50% ỉeptin chưa kết tủa hết còn ở nồng độ 20% và 30% không kết tửa thêm được leptin hoặc có thể do lẫn thêm tạp
chất khác.
Bảng 2.5; Kết tủơ ỉèptỉn bằng amonisưlphat 40%
Qua bước két tủa tỉ lệ thu hồi đạt 85,27 %. • Sơ đồ đông khô protein - leptin tạo chế phẩm thô (chế phấm đông
khô)
- Pha chế hỗn dịch theo tỉ lệ lg kết tủa protein - leptỉn với 5ml đệm. Sau đó hút chính xác l mỉ hỗn dịch đã pha loằng cho vào lọ thủy tinh dùng để đông khô, đặt các lọ vào khay.
- Đưa khay vào tủ lạnh, đông lạnh ở nhiệt độ - 40()c, tốc độ làm lạnh khoảng l°Cj thời gian khoảng lh.
- Sau khi chế phẩm đông rán hoàn toàn, đưa chế phẩm vào buồng đông khô, hút chân không đến áp suất khoảng 0,1 mbar, nhiệt độ condensor khoảng -45ỡc, thời gian 24h.
- Tiếp tục tãng nhiệt độ của giá lên tới nhiệt độ (-40)- (-50°C), duy trì áp suất nhiệt độ buồng ngưng, thời gian sấy 48h.
- Lẩy vỉ thuốc ra khỏi khay, cho vào túi PE, đặt trong bình hút ẩm có chứa vôi sống dể bảo quản.
Tiến hành hòa tan chế phẩm đông khô và đo quang, ta thu được kết quả: tổng số protein là 390mg. Như vậy từ lg bột đông khô pha loãng với 5 ml đệm, tiến hành đo quang thu được 130,00 ml/ml protein. Do đó trong Ig bột đông khô có 650,00 mg protein.
Bảng 2.6: Protein íống sơ của chế phẩm protein - ỉepíin dung dịch và của chế phẩm đồng khô
protein tống sô (mg)
■ protein tổng số (mg>
Chế phẩm Chểphầm dungdịch đông khô
394 393 392 391 390 389 388
Hình 2.6: So sảnh heợng protein tổng số của chế phẩm protein - íeptin dung dịctĩ với chếphấm đông khô
Nhận xét: Tổng lượng protein cùa chế phẩm dung dịch và ché phẩm đông khô là khác nhau. Nhưng sự khác nhau này không đáng kế. Nguyên nhân có thề do quá trình đông khỏ, việc để vỉ thuốc trong bình ngưng thời gian dài làm protein - ỉeptin trào bọt ra ngoài vì vạy mà tổng lượng protein - leptin của chế phấm đông khô bị giảm hơn so với chế phẩm dung dịch.