Staphylococcus spp. tại mật độ 106CFU/ml và 105 CFU/ml
* Kết quả khảo sát MIC trên Staphylococcus spp. tại mật độ 106
CFU/ml và 105 CFU/ml.
Khảo sát tình hình kháng kháng sinh của 20 chủng vi khuẩn
Staphylococcus spp. đối với 4 loại kháng sinh: Danofloxacin, doxycycline, ceftiofur, cefquinome được trình bày trong Bảng sau:
Bảng 4.3: Kết quả đề kháng của 20 chủng vi khuẩn Staphylococcus spp..
Kháng sinh Số chủng thử
106 CFU/ml 105 CFU/ml
Nhạy Trung bình Kháng Nhạy Trung bình Kháng
Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Dano 20 0 0 2 10,00 18 90,00 1 5,00 6 30,00 13 65,00 Doxy 20 1 5,00 8 40,00 11 55,00 1 5,00 8 40,00 11 55,00 Cefq 20 0 0 8 40,00 12 60,00 3 15,00 5 25,00 10 50,00 Ceft 20 2 10,00 0 0 18 90,00 2 10,00 4 20,00 14 70,00
Từ Bảng 4.3 cho thấy tỉ lệ vi khuẩn Staphylococcus spp. đề kháng với 4 loại kháng sinh luôn ở mức cao (≥55%).
Kết quả khảo sát MIC tại mật độ vi khuẩn 106 CFU/ml cho thấy Staphylococcus spp. có tỉ lệ đề kháng cao đối với danofloxacin, ceftiofur, cefquinome, doxycyline, tỉ lệ đề kháng lần lược là 90,00%, 90,00%, 60,00% và 55,00%. Kết quả này có phần cao hơn nhiều báo cáo trước đây.
Một số nghiên cứu cho thấy Staphylococcusaureus gây bệnh viêm vú trên bò sữa có tỉ lệ đề kháng với norfloxacin, ciprofloxacin, tetracycline ở mức 4,88%, 7,32%, và 36,59% (Trâm, 2007) và kháng với enprofloxacin, doxycycline, ceftiofur lần lược là 33,33%, 41,87%, 8,38% (Hạnh, 2010).
Sự khác biệt giữa các báo cáo là do tình hình diễn biến dịch bệnh. Hiện nay tụ cầu khuẩn kháng thuốc là vấn đề nang giải bởi các chủng kháng thuốc xuất hiện ngày càng nhiều và tính đa kháng ngày càng mạnh (điển hình là MRSA). Ngoài ra khoảng cách thời gian, vị trí địa lý và đối tượng khảo sát khác nhau đã chi phối đến kết quả.
Trong nghiên cứu này cho thấy khi giảm mật độ vi khuẩn thì tỉ lệ đề kháng có biểu hiện giảm theo nhưng không đồng loạt ở mọi kháng sinh. Tỉ lệ kháng giảm nhiều nhất đối với danofloxacin và ceftiofur từ 90,00% xuống còn 65,00%, và 70,00% (tại 105 CFU/ml). Tỉ lệ kháng giảm nhẹ đối với cefquinome là 10,00% và không đổi đối với doxycycline.
Tỉ lệ đề kháng giảm không đồng nghĩa với tỉ lệ nhạy tăng. Nhưng kết quả Bảng 4.3 cho thấy tỉ lệ nhạy lại tăng lên đối với một số kháng sinh như cefquinome (tăng 15,00%) và danofloxacin (tăng 5,00%).
Bằng phương pháp so sánh Chi quare test tỉ lệ kháng của vi khuẩn
Staphylococcus spp. tại mật độ 106 CFU/ml và 105 CFU/ml cho thấy sự khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê. Điều này cho phép chúng tôi kết luận tính kháng thuốc không phụ thuộc vào mật độ vi khuẩn. Bởi một khi vi khuẩn đã mang gene đề kháng với kháng sinh thì tại bất cứ mật độ nào gene đó cũng tồn tại và tính kháng thuốc vẫn được bảo toàn.
Một trong những yếu tố không kiểm soát được như khoảng cách thời gian, khoảng cách địa lý, tình hình diễn biến dịch bệnh, các yếu tố kiểm soát được như đối tượng khảo sát, phương pháp lấy mẫu, kích cở mẫu và phương phát sử lý số liệu đã chi phối trực tiếp đến kết quả nghiên cứu. Nên sự khác nhau giữa các kết quả là hoàn toàn hiển nhiên.
* Kết quả khảo sát tính đa kháng của vi khuẩn Staphylococcus spp. với các loại kháng sinh.
Bảng 4.4: Kết quả kiểm tra tính đa kháng của vi khuẩn Staphylococcus spp.
Kháng sinh bị kháng Số chủng kháng Tỉ lệ (%)
Dano + Doxy 1 5,00
Dano + Ceft 1 5,00
Cefq + Ceft 2 10,00
Dano + Cefq + Ceft 3 15,00
Dano + Doxy + Ceft 3 15,00
Dano + Doxy + Cefq + Ceft 7 35,00
Tổng 17 85,00
Qua Bảng 4.4 cho thấy Staphylococcus spp. có khả năng đề kháng cùng lúc với nhiều kháng sinh. Trong số 20 chủng thử nghiệm thì có đến 17 chủng đề kháng từ 2 đến 4 loại kháng sinh, chiếm tỉ lệ cao là 85,00%. Trong đó đề kháng với 4 loại kháng sinh là cao nhất lên tới 7 chủng, chiếm tỉ lệ 35,00%. Ngoài ra đề kháng cùng lúc với 2-3 loại kháng sinh củng phổ biến ở mức 20,00 và 30,00%.
Kết quả đa kháng của Staphylococcus spp. cho thấy tính đa kháng của vi khuẩn Gram dương mạnh hơn so với vi khuẩn Gram âm. Phần lớn các chủng
E. coli kháng cùng lúc từ 2 đến 3 loại kháng sinh là chính (chiếm tỉ lệ 75,00%). Trong khi đó tính đa kháng của Staphylococcus spp. thể hiện qua khả năng kháng từ 3 đến 4 cùng lúc (65,00%).
Theo các nhà khoa học, tụ cầu khuẩn có khả năng đề kháng với nhiều kháng sinh cùng lúc là do cơ chế sinh men beta-lactamase trong đó men beta- lactamase phổ rộng có hoạt lực cao và chiếm tỉ lệ lớn (Trần Đỗ Hùng và Trần Thái Ngọc, 2011). Các men này có tác dụng phá hủy cấu trúc vòng beta- lactam làm cho các kháng sinh có cấu trúc beta-lactam mất tác dụng (điển hình là MRSA). Ngoài ra các gene đề kháng khác có thể du nhập dễ dàng qua thể truyền plasmid theo phương thức tiếp hợp.
4.1.3Khảo sát giá trị MIC của 4 loại kháng sinh trên vi khuẩn
Salmonella spp.
* Kết quả khảo sát MIC trên Salmonella spp. tại mật độ 106 CFU/ml và 105 CFU/ml.
Kết quả khảo sát nồng độ ức chế tối thiểu của 4 loại kháng sinh: Danofloxacin, doxycycline, ceftiofur, cefquinome trên 15 chủng vi khuẩn
Bảng 4.5: Kết quả đề kháng của 15 chủng vi khuẩn Salmonella spp..
Kháng sinh Số chủng thử
106 CFU/ml 105 CFU/ml
Nhạy Trung bình Kháng Nhạy Trung bình Kháng
Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Dano 15 0 0 2 13,33 13 86,67 1 6,67 3 20,00 11 73,33 Doxy 15 2 13,33 3 20,00 10 66,67 3 20,00 2 13,33 10 66,67 Cefq 15 5 33,33 5 33,33 5 33,33 9 60,00 4 26,67 2 13,33 Ceft 15 4 26,67 1 6,67 10 66,67 5 33,33 2 13,33 8 53,33
Qua khảo sát MIC tại mật độ vi khuẩn 106 CFU/ml cho thấy giá trị MIC của 4 loại kháng sinh đối với Salmonella spp. phân bố trong khoảng 0,78 µg/ml đến > 50 µg/ml. Theo kết quả phân loại thu được tỉ lệ số chủng Salmonella spp. đề kháng với danofloxacin, doxycycline, ceftiofur, cefquinome lần lược là 86,67%, 66,67%, 66,67% và 33,33%. Tỉ lệ kháng tại mật độ 105 CFU/ml có biểu hiện giảm đối với danofloxacin (từ 86,67% xuống còn 73,33%), ceftiofur (từ 66,67% xuống còn 53,33%) và cefquinome (từ 33,33% xuống còn 13,33%).
Bằng phương pháp so sánh Chi quare test tỉ lệ kháng của Salmonella spp. với kháng sinh tại hai mật độ cho thấy sự khác biệt chưa có ý nghĩa trong thống kê (P = 0,808). Kết quả này cho phép ta kết luận tính kháng thuốc của Salmonella spp. không phụ thuộc vào mật độ vi khuẩn.
Phân tích Bảng 4.5 cho thấy có sự biến động tỉ lệ nhạy giửa hai mật độ, từ 0% tăng lên 6,67% đối với danofloxacin, từ 33,33% tăng lên 60,00% đối với cefquinome, từ 26,67% tăng lên 33,33% đối với ceftiofur và từ 13,33% tăng lên 20,00% đối với doxycycline. Và hầu như giá trị MIC chỉ giao động trong khoảng nồng độ kế kận. Điều này có thể lý giải là sự suy yếu của vi khuẩn sau mỗi lần cấy chuyển.
Ngoài ra tỉ lệ kháng kháng sinh tại mật độ 106 CFU/ml cho thấy
Salmonella đề kháng cao với các kháng sinh thử nghiệm. Tỉ lệ kháng đặc biệt cao với danofloxacin doxycycline, ceftiofur và đề kháng trung bình với cefquinome. Tính đề kháng mạnh đối với danofloxacin khi có đến 12 chủng kháng ở mức > 50 µg/ml, chiếm 80,00%. Mức đề kháng cao đối với danofloxacin có thể là do Salmonella đã hình thành cơ chế kháng nhóm flouroquinolone thông qua việc sử dụng phổ biến các kháng sinh trong nhóm flouroquinolone.
Theo một số báo cáo gần đây cho thấy các kháng sinh cùng nhóm flouroquinolone và tetracycline đang bị đề kháng mạnh. Cụ thể là tỉ lệ
Salmonella spp. đề kháng với oxytetracycline là 45,00% [33], kháng tetracycline là 75,00% [34], kháng ofloxacin là 83,30% [33], kháng norfloxacin là 50,00% [34]. Tuy chưa có các báo cáo tiến hành trong nước về tình hình đề kháng với các kháng sinh cephalosporin thế hệ 3, 4 nhưng nhiều nghiên cứu cho thấy sự xuất hiện phổ biến các gene sinh men beta-lactamase trong đó có cephalosporinase là nguyên nhân chính khiến các kháng sinh cephalosporin mất tác dụng.
* Kết quả khảo sát tính đa kháng của vi khuẩn Salmonella spp. với các loại kháng sinh.
Bảng 4.6: Kết quả kiểm tra tính đa kháng của vi khuẩn Salmonella spp.
Kháng sinh bị kháng Số chủng kháng Tỉ lệ (%)
Doxy + Ceq 1 6,67
Dano+ Doxy 1 6,67
Dano + Ceti 3 20,00
Dano + Doxy + Ceq 1 6,67
Dano + Doxy + Ceti 4 26,67
Dano + Ceq + Ceti 1 6,67
Dano + Doxy + Ceq + Ceti 2 13,33
Tổng 13 86,67
Qua Bảng 4.6 cho thấy Salmonella spp. có khả năng đề kháng cùng lúc với nhiều kháng sinh. Có 86,67% số chủng đề kháng từ 2 đến 4 loại kháng sinh. Trong đó đề kháng cùng lúc với 2, 3 loại kháng sinh là chính (11 trong 15 chủng, chiếm tỉ lệ 73,34%). Tỉ lệ vi khuẩn kháng 4 loại kháng sinh cùng lúc thấp (2 chủng chiếm 13,33%).
So sánh với kết quả đa kháng trên vi khuẩn E. coli ta thấy có sự giống nhau về tính đa kháng của trực khuẩn Gram âm. Kết quả này phù hợp với nhận định của Bùi Thị Tho (2003) khi cho rằng trực khuẩn Gram âm có thể
kháng từ 3 loại kháng sinh trở lên là chính. Ngoài ra theo nghiên cứu của Lực (2007) cho thấy có đến 30,00% số chủng Salmonella spp. kháng cùng lúc với 3 loại kháng sinh.
Ngoài ra Bảng 4.6 cho thấy đa số chủng điều có khả năng đề kháng cùng lúc với danofloxacin và doxycyline. Điều này cho thấy việc sử dụng kháng sinh thường xuyên, phổ biến và trong thời gian dài đã tác động mạnh đến tình hình đề kháng. Vì flouroquinolone và tetracycline là hai nhóm kháng sinh được sử dụng từ lâu và rất phổ biến trong chăn nuôi thú y nên khả năng bị đề kháng và đa kháng cùng lúc là điều hiển nhiên.
Tính đa kháng phổ biến trên họ trực khuẩn Gram âm trong đó có vi khuẩn Salmonella spp.. Nguyên nhân chính là do chúng dễ dàng thu nhận các R-plasmid từ các cá thể cùng loài hoặc khác loài, sự thu nhận các R-plasmid được tích lũy theo thời gian và hình thành nên tính đa kháng.
4.1.4 Khảo sát giá trị MIC của 4 loại kháng sinh trên vi khuẩn
Klebsiella spp.
Kết quả khảo sát MIC trên Klebsiella spp. tại mật độ 106 CFU/ml và 105 CFU/ml.
Khảo sát mức độ đề kháng kháng sinh của 15 chủng vi khuẩn Klebsiella
spp. đối với 4 loại kháng sinh: Danofloxacin, doxycycline, ceftiofur, cefquinome được trình bày trong Bảng sau:
Bảng 4.7: Kết quả đề kháng của 15 chủng vi khuẩn Klebsiella spp..
Kháng sinh Số chủng thử
106 CFU/ml 105 CFU/ml
Nhạy Trung bình Kháng Nhạy Trung bình Kháng
Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Dano 15 1 6,67 5 33,33 9 60,00 1 6,67 6 40,00 8 53,33 Doxy 15 0 0 2 13,33 13 86,67 0 0 4 26,67 11 73,33 Cefq 15 5 33,33 3 20,00 7 46,67 10 66,67 5 33,33 0 0 Ceft 15 0 0 0 0 15 100 0 0 0 0 15 100
Qua khảo sát MIC của 4 loại kháng sinh trên 15 chủng Klebsiella spp. chúng tôi thu được kết quả sau:
Tại mật độ 106 CFU/ml vi khuẩn Klebsiella spp. đề kháng trung bình với cefquinome là 46,67% và đề kháng cao với ceftiofur, danofloxacin, doxycycline với tỉ lệ 100%, 86,67%, 60,00%. Tỉ lệ nhạy với cefquinome là cao nhất với 33,33%. Tỉ lệ nhạy thấp đối với danofloxacin là 6,67%. Trong khi đó doxycycline, ceftiofur không cho kết quả nhạy cảm.
Tại mật độ 105 CFU/ml tỉ lệ đề kháng của Klebsiella spp. giảm mạnh đối với cefquinome từ 46,67% xuống còn 0%. Tỉ lệ đề kháng đối với danofloxacin, doxycycline củng giảm nhẹ so với kết quả tại mật độ 106 CFU/ml là 53,33%, và 73,33% và . Tỉ lệ kháng đối với cefquinome giảm đồng nghĩa với giá trị nhạy và nhạy trung bình tăng lên. Tuy nhiên có sự tăng mạnh tỉ lệ nhạy đối với cefquinome từ 33,33% tại 106 CFU/ml tăng lên 66,67% tại 105 CFU/ml. Điều này cho thấy đối với cefquinome, nếu nồng độ vi khuẩn thấp thì khả năng ức chế ngày càng tăng. Phần lớn khi giảm mật độ vi khuẩn thì giá trị MIC giảm xuống mức kế cận.
Bằng cách sử dụng công cụ Chi quare test so sánh tỉ lệ số chủng Klebsiella
spp. đề kháng tại mật độ 106 CFU/ml và mật độ 105 CFU/ml cho thấy sự khác biệt này chưa có ý nghĩa thống kê. Điều này cho phép kết luận tính kháng thuốc của vi khuẩn không phụ thuộc vào mật độ vi khuẩn.
Phân tích thêm Bảng 4.7 ta thấy cefquinome ít bị Klebsiella spp. đề kháng hơn so với 3 kháng sinh còn lại. Để giải thích cho điều này, có 2 lý do sau: Thứ nhất là do kháng sinh này mới được lưu hành, chưa được sử dụng phổ biến cho nên tỉ lệ kháng kháng sinh do việc sử dụng kháng sinh còn ở mức thấp. Thứ hai là do cefquinome có hoạt lực mạnh trên vi khuẩn Gram âm, tương đối bền dưới sự tác động của men beta-lactamase. Điều này thấy rỏ ở một số chủng cho kết quả đề kháng đối với danofloxacin và ceftiofur (>50 µg/ml) nhưng vẫn cho giá trị MIC đối với cefquinome từ 1,56 đến 0,20 µg/ml (4 chủng chiếm tỉ lệ 26,67%). Tuy nhiên tỉ lệ Klebsiella đề kháng với cefquinome là 46,67%, con số này cho thấy kháng cephalosporin thế hệ 4 đang phát triển trên Klebsiella spp.
* Kết quả khảo sát tính đa kháng của vi khuẩn Klebsiella spp. với các loại kháng sinh.
Bảng 4.8: Kết quả kiểm tra tính đa kháng của vi khuẩn Klebsiella spp..
Kháng sinh bị kháng Số chủng kháng Tỉ lệ (%)
Ceq + Ceti 1 6,67
Doxy + Ceti 1 6,67
Doxy + Ceq 1 6,67
Doxy + Ceq + Cet 4 26,67
Dano + Doxy + Ceti 6 40,00
Dano + Doxy + Ceq + Ceti 2 13,33
Tổng 15 100
Qua Bảng 4.8 cho thấy Klebsiella spp. có tính đa kháng cao (100% kháng từ 2 loại kháng sinh trở lên). Tính đa kháng mạnh qua khả năng kháng cùng lúc 3 loại kháng sinh (66,67%). Ngoài ra có 20,00% số chủng kháng 2 loại kháng sinh và 13,33% kháng 4 loại kháng sinh.
Nhiều nghiên cứu cho thấy cơ chế ESBL xuất hiện chủ yếu trên vi khuẩn
E. coli và Klebsiella spp. Cơ chế này giúp vi khuẩn có thể đề kháng với nhiều kháng sinh có cấu trúc beta-lactam. Ngoài ra việc đề kháng chéo đối với flouroquinolone có thể xảy ra khi vi khuẩn sinh ESBL [36].
Kết quả này cũng cho thấy vi khuẩn Gram âm đa kháng mạnh từ 2 đến 3 loại kháng sinh trong thử nghiệm.
4.1.5Khảo sát giá trị MIC của 4 loại kháng sinh trên vi khuẩn
Pseudomonas spp.
* Kết quả khảo sát MIC trên Pseudomonas spp. tại mật độ 106 CFU/ml và 105 CFU/ml.
Khảo sát mức độ đề kháng với 4 loại kháng sinh của 11 chủng vi khuẩn
Bảng 4.9: Kết quả đề kháng của 11 chủng vi khuẩn Pseudomonas spp..
Kháng sinh Số chủng thử
106 CFU/ml 105 CFU/ml
Nhạy Trung bình Kháng Nhạy Trung bình Kháng
Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Số chủng Tỉ lệ % Dano 11 4 36,36 5 45,45 2 18,18 5 45,45 4 26,67 2 18,18 Doxy 11 0 0 3 27,27 8 72,72 1 9,09 2 13,33 8 72,72 Cefq 11 4 36,36 4 36,36 3 27,27 9 81,82 2 13,33 0 0 Ceft 11 0 0 0 0 11 100 0 0 0 0 11 100
Qua bảng 4.9 cho thấy vi khuẩn Pseudomonas spp. đề kháng cao với hai loại kháng sinh là ceftioffur và danofloxacin.
Pseudomonas spp. vẩn còn nhạy cảm với danofloxacin và cefquinome khi mức đề kháng thấp. Cụ thể là:
Tại mật độ vi khuẩn 106 CFU/ml, tỉ lệ đề kháng cao đối với ceftiofur, doxycycline là 100% và 72,72%. Trong khi đó
Pseudomonas spp. đề kháng với danofloxacin, cefquinome chỉ ở mức 18,18% và 27,27%. Ngoài ra tỉ lệ nhạy cảm đối với