Mục đích: tạo nguồn giống nấm Linh chi Nhật mới, thuần chủng cung cấp cho các thí nghiệm tiếp theo.
Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 18 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học
Các bước tiến hành:
Chuẩn bị giống gốc: giống nấm bao gồm các dạng mang sinh khối của nấm Linh chi. Điểm quan trọng là giống phải thuần, không bị lẫn tạp bởi vi khuẩn, nấm mốc hay các loài nấm khác. Giống gốc được phân lập từ tai nấm đã tuyển chọn (có hình thái vừa, không bị sâu, còn tươi nguyên, không quá già hay quá non).
Tai nấm sau khi thu về được xử lý theo các bước sau (trong điều kiện vô trùng): + Bề mặt tai nấm được khử trùng bằng cồn 70o.
+ Dùng dao tách đôi và cắt một phần mô nấm sạch (khoảng 1cm2) bên trong. + Cấy vào môi trường PDA (Potato D-glucose Agar) đã chuẩn bị sẵn và ủ ở 30oC.
+ Khi tơ nấm phát triển mạnh và lan ra từ tổ chức nấm, tiến hành cấy chuyển và kiểm tra độ thuần chủng của khuẩn lạc dưới kính hiển vi quang học. Sau khi mẫu phân lập đã thuần tiến hành cấy chuyền sang ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng CM (Complete Medium), ủ ở 30oC đến khi tơ nấm mọc gần đầy ống nghiệm. Tiếp tục kiểm tra độ thuần của tơ nấm trong các ống nghiệm và trữ ở 4oC để bảo quản.
- Theo dõi đánh giá: Quan sát độ thuần nhất của khuẩn ty nấm dưới kính hiển vi quang học.
Chuẩn bị giống cấp 1: giống cấp 1 có được là do cấy chuyển trực tiếp giống gốc từ đĩa petri sang môi trường giống cấp 1 (trên lúa) đã chuẩn bị trước.
+ Cắt từng miếng agar từ đĩa petri (giống gốc), chuyển vào túi polypropylene có chứa lúa đã chuẩn bị trước, đem ủ ở nhiệt độ phòng (28-30oC) cho đến khi tơ nấm phát triển tốt và lan sâu vào môi trường hạt thóc tạo thành giống cấp 1.
Chuẩn bị giống cấp 2:
+ Dùng muỗng, lấy từng muỗng lúa có sợi nấm đang phát triển chuyển sang bịch que khoai mì (môi trường giống cấp 2) và đậy kỹ nút gòn lại, ủ ở nhiệt độ phòng (28- 30oC) để sợi nấm phát triển và lan đều ra hết que khoai mì.
- Theo dõi đánh giá: quan sát sự phát triển của tơ nấm, về màu sắc và hình dạng của tơ nấm. Nấm phát triển tốt có màu sắc đồng nhất (màu trắng), không ngã vàng, tơ nấm lan đều khắp khối que khoai mì, không tạo mùi khó chịu.
Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 19 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học
3.2.3. Khảo sát ảnh hưởng của cơ chất và chất dinh dưỡng bổ sung đến năng suất và chất lượng của nấm Linh chi giống Nhật