2.4.5.1. Nghiên cứu độổn định của tetrodotoxin trong một số dung môi
Khảo sát khoảng 5 dung môi (methanol, đệm citrat pH 4-5, dung dịch acid acetic
loãng 2%, đệm phosphat pH 4-5, đệm acetat pH 4-5), theo dõi, phân tích đánh giá
chất lượng hàng tháng hoặc định kỳ 3 tháng trong 1 năm
TTX được hoà tan riêng biệt trong các dung dịch đệm với hàm lượng 0,1 mg.ml-1: cân chính xác x mg TTX vào bình định mức 25,0 ml, thêm dung môi hòa tan và pha loãng vừa đủ tới vạch. x được tính theo công thức sau:
x = 2,5.100/P
Dùng burret chia vạch đóng dung dịch vào lọ thủy tinh màu nâu dung tích 2 ml, lượng đóng chính xác 1,0 ml/ống.
Điều kiện nghiên cứu độổn định: nhiệt độ - 20oC ± 2oC trong tủđông.
Định kỳđánh giá chất lượng: Lấy mẫu đánh giá tại các thời điểm 0, 3, 6 tháng. Đánh giá chất lượng dựa trên các chỉ tiêu như:
- Cảm quan: Dung dịch trong suốt không màu
- Định tính: Thể hiện đúng phép thửđịnh tính của TTX
- Định lượng: Hàm lượng tetrodotoxin trong mỗi ống phải đạt từ 99,5% đến 100,5 % của C11H17N3O8, so với lượng ghi trên nhãn (0,1mg/mL).
2.4.5.2. Quy trình đóng ống chuẩn, 100 µg chất/lọ 1 ml
Xây dựng quy trình đóng ống chuẩn đúng quy định đối với chất độc
- Đóng 0,1 mg /ống dưới dạng dung dịch hòa tan trong dung môi phù hợp (một trong số các dung môi khảo sát ở mục 2.4.5.1)
- Tiến hành: Hòa tan nguyên liệu tetrodotoxin trong dung môi phù hợp để có nồng độ 0,1 mg/ml bằng cách: Cân chính xác x g TTX vào bình định mức 100 ml, thêm dung môi hòa tan và pha loãng vừa đủ tới vạch. x được tính theo công thức sau:
x = 10.100/P
trong đó: p là hàm lượng (%) của C11H17N3O8 trong nguyên liệu tetrodotoxin.
- Dùng burret chia vạch đóng dung dịch vào lọ thủy tinh màu nâu dung tích 2 ml, lượng đóng chính xác 1,0 ml/lọ.
- Hàn kín - Dán nhãn.
2.4.5.3. Kiểm tra, đánh giá chất lượng
- Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho lọ chuẩn
Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng với các chỉ tiêu: + Cảm quan
+ Định tính + Định lượng
- Kiểm tra đánh giá đồng nhất lô
Yêu cầu:
Lô sản xuất được coi là đồng nhất khi giá trị RSD của kết quả hàm lượng giữa các ống được kiểm tra ≤ 0,5% ⇒ điều kiện đóng gói ổn định.
Tiến hành:
+ Lấy ngẫu nhiên ít nhất 10 ống đề kiểm tra đồng nhất quá trình đóng gói chỉ tiêu hàm lượng.
+ Áp dụng phương pháp định lượng trong Tiêu chuẩn ống chuẩn TTX để tiến hành xác định hàm lượng.
- Đánh giá liên phòng thí nghiệm về chất chuẩn
Áp dụng phương pháp định lượng trong Tiêu chuẩn chất lượng lọ chuẩn TTX. Đánh giá liên phòng thí nghiệm, ít nhất là 2 phòng thí nghiệm, mỗi PTN nhận được chất chuẩn gốc và 06 lọ chuẩn bán thành phẩm
So sánh kết quả giữa các phòng thí nghiệm, đánh giá kết quả theo phân tích ANOVA, so sánh 2 giá trị 2 giá trị Ftn và Ftc
Trường hợp 1: Ftn ≤ Ftc ⇒ Kết quả trung bình của các phòng thử nghiệm giống nhau, phương pháp phân tích có độ tái lặp và độ lặp lại tốt.
Trường hợp 2: Ftn > Ftc ⇒ Kết quả trung bình của các phòng thử nghiệm khác nhau, phương pháp phân tích không có độ tái lặp và độ lặp lại.
- Xác định giá trị công bố trên nhãn và chứng chỉ phân tích
Tập hợp kết quả phân tích đánh giá liên phòng thí nghiệm, trong trường hợp Ftn ≤ Ftc , nếu tất cả các kết quả thu được của 2 PTN nằm trong khoảng 99,5 % đến 100,5 % so với hàm lượng nhãn thì kết quả ghi trên nhãn và chứng chỉ: Mỗi lọ chất chuẩn
tetrodotoxin có chứa 0,1 mg tetrodotoxin (C11H17N3O8). Nếu có bất cứ kết quả nào
nằm ngoài khoảng 99,5 % đến 100,5 % so với hàm lượng nhãn thì phải xem xét lại toàn bộ quá trình thử nghiệm và/hoặc quá trình đóng lọ.
