1.5.2.1. Lựa chọn nguyên liệu
- Để đáp ứng mục đích sử dụng trong các phép thử hoá học, vật lý hay vi sinh, yêu cầu nguyên liệu làm chất đối chiếu phải là một khối đồng nhất (không được lẫn tá dược hay chất bảo quản) được lựa chọn từ các lô nguyên liệu sản xuất thuốc có chất
lượng tốt nhất và được cung cấp bởi từ các nhà sản xuất Dược phẩm. TTX hiện nay là chất cấm mua bán trên thế giới, chưa được coi là thuốc hay dược phẩm, vì vậy khó có thể mua được. Do đó nguyên liệu này sẽđược cung cấp từ sản phẩm của đề tài này.
- Độ tinh khiết của nguyên liệu dự kiến thiết lập chất đối chiếu phụ thuộc vào mục đích sử dụng. Hiện nay chưa có cơ sở nghiên cứu nào trong nước điều chế được
TTX có độ tinh khiết cao và đánh giá được độ tinh khiết, theo yêu cầu của Đề tài,
chúng tôi sẽ chiết xuất và tinh chế TTX có độ tinh khiết ≥ 95,0%, phù hợp với yêu cầu thiết lập chất chuẩn.
1.5.2.2. Xây dựng quy trình phân tích
Các phương pháp hoá lý được sử dụng để đánh giá chất lượng nguyên liệu thiết lập
chất đối chiếu phải phản ánh được đúng tính chất của chất đó, có độ chính xác và độ lặp lại.
- Các phương pháp phân tích được sử dụng đểđịnh tính:
Đó là các phương pháp có khả năng chứng minh được các tính chất đặc trưng của hai mẫu là đúng. Đáp ứng mục đích này thường đo phổ IR, ngoài ra có thể áp dụng phương pháp khác nhưđo phổ tử ngoại, TLC, đo điểm chảy, xác định góc quay cực riêng.
- Các phương pháp xác định độ tinh khiết:
Các phương pháp xác định độ tinh khiết thường dùng là: sắc ký lớp mỏng (SKLM,
TLC), sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), quang phổ tử ngoại khả kiến (UV-VIS),
đo năng suất quay cực, quét nhiệt vi sai (DSC), xác định điểm nóng chảy (MP) hay
phân tích nhiệt (TGA). Dù bất cứ phương pháp nào được sử dụng để đánh giá các
nguyên liệu thiết lập chất đối chiếu thì điều cơ bản nhất là hàm lượng của các tạp chất phải được xác định. Các phương pháp trên đều không phù hợp với thiết lập
chất chuẩn TTX, việc xác định độ tinh khiết hoặc tạp chất trong TTX có thể được xác định bằng NMR kết hợp với phổ khối phân giải cao (FT ICR, ESI orbitrap)
- Định lượng
+ Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với nhiều loại detector khác nhau: Detector UV – VIS, detector chuỗi diod DAD, detector huỳnh quang FLD, khối phổ MS là phương pháp hay được sử dụng nhất để xác định hàm lượng, tùy theo từng chất mà sử dụng kỹ thuật phù hợp. Hàm lượng chất trong mẫu thử được tính toán dựa vào diện tích píc của mẫu thử (dung dịch thử), diện tích píc mẫu chuẩn (dung dịch chuẩn) đã biết trước nồng độ trong cùng điều kiện phân tích.
+ Đối với chất chuẩn TTX, do đóng gói với lượng rất nhỏ (0,1 mg – 1,0 mg/lọ) và có hoạt lực rất mạnh, do đó phải dùng phương pháp phân tích có độ chính xác và độ nhạy cao. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ với detector 3 tứ cực nối tiếp (LC MS/MS, triple quadrupoles)
1.5.2.3. Quy trình đóng gói, bảo quản
Quá trình sản xuất chất chuẩn được thực hiện theo quy trình thao tác chuẩn (SOP) và được kiểm soát nghiêm ngặt. Chất chuẩn đối chiếu hóa học được cân bằng cân phân tích có độ chính xác cao, được thực hiện trong buồng đóng chất chuẩn (Glove-
Box) và được bảo quản trong tủ bảo quản chất chuẩn được kiểm soát môi trường
(thường bảo quản từ 2 – 8oC). Tuy theo đặc tính, chất chuẩn đối chiếu hóa học thường đóng từ vài miligam đến vài trăm miligam/lọ. Chất chuẩn TTX có hoạt lực cao, có giá trị lớn, trên thế giới thường đóng 1mg/lọ và được bảo quản ở nhiệt độ rất thấp (-20oC). Các chất chuẩn thông thường định kỳ được đánh giá và bảo quản sự dụng dài lâu.
Hình 1. 9. Buồng đóng chuẩn (Glove-Box) và tủ bảo quản chất chuẩn tại VKNTTW
1.5.2.4. Hoạt động thiết lập chất chuẩn tại Viện Kiểm nghiệm thuốc TW
Hiện nay, VKNTTW đã có bộ chất chuẩn phục vụ kiểm tra và giám sát chất lượng thuốc với khoảng gần 900 chất bao gồm chuẩn quốc tế, chuẩn khu vực và chuẩn phòng thí nghiệm trong đó chuẩn do VKNTTW nghiên cứu thiết lập là 310 hoạt chất (157 chất chuẩn quốc gia và 184 chất chuẩn phòng thí nghiệm), chủ yếu là các hóa dược. Từ năm 1995, VKNTTW là quan sát viên và chính thức từ 1997, được WHO công nhận là thành viên thiết lập chất chuẩn của khu vực và của WHO. VKNTTW tham gia hợp tác đánh giá liên phòng thí nghiệm về chất chuẩn với các nước trong khu vực và trên thế giới. Trong 10 năm lại đây, một sốđề tài thực hiện ở Việt Nam do Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương chủ trì đã thiết lập chất được khoảng 50 chất chuẩn DĐVN là chất đặc trưng chiết từ dược liệu.
