2.3.2.1 Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao.
Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được sử dụng để định lượng netilmicin sulfat[14].
Điều kiện sắc ký
Cột sắc ký:Waters Symmetry C8 150mm ×4,6mm, kích thước hạt nhồi 5µm.
Pha động: Acetonitril: đệm phosphat 0,05M pH 3,8; tỷ lệ 15:85 Tốc độ dòng: 1 ml/phút
Thể tích tiêm mẫu: 20 µl.
Detector UV, bước sóng 206,4 nm.
Chuẩn bị mẫu chuẩn và mẫu thử
Mẫu chuẩn:
Hòa tan 1 khối lượng chính xác (khoảng 0,072g) netilmicin sulfat chuẩn trong50 ml hỗn hợp dung môi acetonitril : nước tỷ lệ 1:1, để thu được dung dịch có nồng độnetilmicin đã biết khoảng 1 mg/ml. Lọc qua màng lọc 0,45 µm.
Mẫu thử:
Lấy 1,00 ml mẫu thử cần định lượng đem pha loãng 100 lần bằng hỗn hợp acetonitril : nước 1:1. Lọc dung dịch này qua màng lọc 0,45µm.
21
Tiến hành sắc ký, thu được sắc ký đồ và diện tích pic của mẫu chuẩn và thử tương ứng.
Nồng độ netilmicin trong mẫu đem định lượng được tính theo công thức sau:
CT =
Trong đó:
CT: nồng độ netilmicin trong mẫu thử (g/ml).
ST, SC: diện tích pic netilmicin trên sắc đồ của dung dịch thử và dung dịch chuẩn tương ứng (mAU.s).
mC: khối lượng chất chuẩn đã cân (g).
2.3.2.2 Phương pháp đo pH
Sử dụng máy đo pH INOLAB, đo và điều chỉnh pH của các dung dịch netilmicin sau khi pha. Đo pH của các dung dịch sau bảo quản. Từ đó đánh giá mức độ thay đổi pH (ΔpH) của các dung dịch netilmicin.
ΔpH= pHtrước - pHsau
2.3.2.3 Phương pháp thử độ vô khuẩn
Thử theo phương pháp màng lọc, Dược điển Việt Nam IV [6].